中医药干预帕金森病实验研究进展

    帕金森病(parkinsons disease，PD)是人类常见的慢性神经系统退行性疾病之一，其特征是中脑黑质致密部多巴胺能神经元变性丢失，纹状体多巴胺水平下降，静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势异常为主要临床症状。其发病机制不明确，主要与环境、遗传、免疫异常、氧化应激、线粒体功能障碍、兴奋性氨基酸、细胞凋亡等因素有关，是多种机制协同作用的结果。帕金森病的病因病机在中国古籍文献中就有记录，最早见于《黄帝内经》“诸风掉眩皆属于肝”，《张氏医通》认为本病多因风、火、痰、虚所致的脾肾虚衰、或挟痰、挟瘀等，描述最详细。现代中医医家对帕金森病研究也颇多，根据其病机多采用清热化痰、活血祛风、补气养血、滋阴潜阳、补肾活血等方法用单味中药、经方或自拟方治疗帕金森病，通过实验验证中药有抗氧化应激、多巴胺神经元保护、抗凋亡等多种作用。但是多数医家对其治疗机理的阐述尚不全面，本文结合近十年来中医药对帕金森病动物的实验研究，对其治疗本病可能发挥作用的机理进行综述。
1抗氧化应激作用
    氧化应激是指当生物体受环境因素或生物条件制约，使抑制自由基产生的机制减弱或自由基生成增加时器官组织的应激反应。氧化应激促进各种分子的非酶自身氧化，损害膜的结构和功能，最终导致多巴胺神经元变性死亡。氧化应激在帕金森发病中占有重要地位。实验证实中医药在帕金森病的抗氧化应激方面有一定作用。
1．1单味中药或其提取物
    半夏生物碱是半夏的有效成分，段凯等制备6一羟多巴(6一OHDA)帕金森病大鼠模型，监测大鼠脑皮质部分及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H202)的含量，发现半夏生物碱可改变大鼠脑皮质部分SOD、GSH的含量，抑制MDA、H2O2的产生，改善大鼠学习记忆能力，对抗大鼠神经系统退行性变。王丹巧等以6一OHDA脑内注射制成帕金森大鼠模型，观察到川芎嗪可降低2，3一二羟基笨甲酸(2，3一OHBA)、2，5．二羟基笨甲酸(2，5一OHBA)含量，减轻左旋多巴引起的帕金森大鼠脑氧化损伤。并有改善帕金森大鼠纹状体细胞外液多巴胺代谢率、减轻其氧化应激损伤的作用。孙芳玲等H通过何首乌二苯乙烯苷对神经突触的影响实验，证明何首乌能抗1．甲基．4．苯基．吡啶离子(MPP+)导致的氧化应激及线粒体损伤，有保护突触结构和功能。肉苁蓉中可以提取总黄酮类化合物，其可提高多种神经递质含量且有强的抗氧化作用，宋阳采用荧光法测定总黄酮类化合物的含量，测定它对羟自由基的清除率为91．5％，说明肉苁蓉中的总黄酮类化合物有强抗氧化活性。金泽等制备6-OHDA帕金森大鼠，以中药洋金花细粉溶液高中低剂量组灌胃3周，观察大鼠SOD、GSH、GSH-Px、MDA含量，发现洋金花可以降低大鼠纹状体MDA含量，升高SOD、GSH、GSH-Px含量，其可能是通过减轻脂质过氧化反应，增强抗氧化防御机制，减少氧化应激，起到治疗帕金森病作用。
    单味中药治疗帕金森病抗氧化作用的实验研究颇多，某些中药有抗氧化及抗自由基损伤作用，最终起到减轻脑神经损伤，治疗帕金森病的作用。
1．2成方或组方
    董梦久等以腹腔注射MPTP制备PD小鼠模型，给予六味地黄丸4周后，发现小鼠脑黑质SOD含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高，MDA含量降低，提示其有提高帕金森小鼠抗氧化能力。何建成等制备6．OHDA帕金森模型大鼠，以复方地黄方(熟地黄、白芍、珍珠母、丹参、全蝎等)灌胃14天，大鼠脑GSH-Px、GSH、SOD含量下降，活性氧及MDA含量升高，提示复方地黄方可提高帕金森大鼠抗氧化、清除自由基能力。陆征宇等以C57／BL雄性小鼠制备MPTP帕金森模型，以补肾养肝熄风方(生地黄、熟地黄、钩藤、白芍、制首乌等)灌胃14天，中药组小鼠纹状体过氧化氢酶(CAT)、GSH-Px、SOD含量高于模型组，纹状体神经元凋亡指数低于模型组。中药可提高帕金森鼠纹状体抗氧化能力。张希廉等制备6-羟多巴损毁内帕金森大鼠模型，以中药抗颤宁(天麻、白芍、龟板、黄芪、厚朴、茯苓、川芎、鸡血藤、当归、甘草)灌胃14天，观察中药可使大鼠血清中一氧化氮(NO)含量降低，大鼠脑中SOD含量升高，MDA含量降低，说明中药有改善大鼠脑组织氧化应激，对抗NO的神经毒性。程为平等以MPTP注射于C57BL鼠制备PD小鼠模型，以中药天元冲剂(天麻、葛根、延胡索、当归、丹皮)灌胃14天，测量小鼠黑质GSH含量升高、GSH-PX活性增强，提示其有增强小鼠脑内自由基防御系统，抗氧化能力。
    复方研究中药有抗氧化的作用，但是其具体如何发挥作用未作研究，根据检测指标来推测中药复方有抗氧化作用。
2多巴胺神经元保护
    帕金森病的主要病理改变是黑质致密部多巴胺能神经元变性坏死，导致黑质纹状体内多巴胺合成减少，多巴胺神经元通过摄取血液中的酪氨酸，经细胞内酪氨酸羟化酶催化形成多巴，再由多巴脱氢酶作用生成多巴胺(dopamine，DA)，多巴胺代谢的最终产物是二羟基苯乙酸(dihydroxyphenylaceticacid，DOPAC)，高香草酸(homovanillic acid，HVA)。到目前为止左旋多巴类药物仍是治疗帕金森病的主要药物，实验发现中药可以提高多巴胺及其代谢产物含量，对于多巴胺神经有保护作用。
2．1单味中药或其提取物
    黄芩苷是黄芩中黄酮类化合物，张忻等、宋扬文等通过对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1．methyl一4-phenyl-1，2，3，6tetrahydropyridine，MPTP)和鱼藤酮所致小鼠帕金森模型研究，发现黄芩酮能够防止帕金森小鼠黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)细胞丢失，升高小鼠脑内谷胱甘肽(L-Glutathione，GSH)水平，抑制铁的聚集，调节二价金属离子转运蛋白1和膜铁转运蛋白1水平，降低氧化应激，对黑质多巴胺能神经有保护作用。杨赣军等观察银杏提取物处理后的MPTP小鼠黑质，发现致密带TH活性细胞数目、纹状体中DA、DOPAC、HVA含量增多，但低于正常，说明其对黑质致密带多巴胺神经元有保护作用。向莉等建立6．羟多巴损毁内帕金森大鼠模型，应用银杏提取物后大鼠损伤侧黑质致密部(sub—stantia nigra compacta，SNC)中脑腹侧被盖区(ven—tral tegmental area，VTA)TH阳性细胞数目增加，DA神经元残存数量增加，提示银杏提取物对于多巴胺神经元有保护作用。人参皂苷是人参的主要活性成分，具有神经营养和神经保护作用，人参皂苷Rgl可使小鼠脑黑质内铁染色阳性细胞数目降低，纹状体DA、DOPAC、HVA含量增加，使黑质内多巴胺转运蛋白(dopamine transporter，DAT)免疫反应活性和DAT-mRNA的表达有所增高，可拮抗MPTP所致的帕金森小鼠脑中过多的铁积聚，拮抗氧化应激反应，对多巴胺神经元损伤有保护作用。刺五加中的芝麻素能够缓解鱼藤碱诱发的帕金森病的行为，保护中脑TH和神经胶质细胞源性神经营养因子缺失。陈专等研究发现刺五加可增加鱼藤碱诱导的帕金森病果蝇脑内多巴胺含量。李霞等通过何首乌提取物对模型小鼠研究发现，何首乌能抑制单胺氧化酶活性，抑制纹状体内单胺递质含量降低，对小鼠神经化学损害有保护作用。姜黄素是中药姜黄的有效成分，彭峰以6-OHDA制备PD大鼠模型，以姜黄色灌胃4周，观察到PD大鼠纹状体多巴胺含量明显升高。天麻的有效单体为天麻素，袁红等以6-OHDA制备PD大鼠模型，以天麻注射液腹腔注射4周，观察到天麻小剂量组可以显著减少DA及其代谢产物HVA、DOPAC为指标，的损耗，使其含量回复正常。
    单味中药实验研究多巴胺神经元保护作用的实验，检测指标相似，大多以DA及其代谢产物HVA、DOPAC，这些指标直接或间接的反应模型体内多巴胺含量的多少，以此推断其治病的有效性，有说服意义。
2．2成方或组方
    邓继敏等制备MPTP帕金森大鼠模型，以真武汤灌胃2l天，显示其能延长大鼠跳台实验的错误潜伏期，减少错误次数，提高在Y迷宫中自主选择的正确率，使大鼠脑皮质中DA、DOPAC、5．羟色氨(5一HT)、5一吲哚乙酸(5一HIAA)、HVA的含量升高，提示其改善大鼠的学习记忆能力与保护脑内多巴胺能神经系统有关。王亚丽等以6一OHDA制成帕金森模型，舒筋解毒方(丹参、白芍、熟地、全蝎、鸡血藤等)灌胃，测定黑质多巴胺及其代谢产物(HVA、DOPAC)的含量，结果显示DA、DOPAC、HVA含量均升高，提示舒筋解毒方可促进帕金森大鼠损毁侧残存的多巴胺神经元分泌DA，同时抑制DA分解，具有一定的多巴胺神经元保护作用。徐立等以MPTP帕金森小鼠模型经腹腔注射氧合震颤素，建立小鼠震颤模型，应用熄风止痉胶囊(当归、白芍、钩藤、蜈蚣、全蝎等)，观察到帕金森小鼠脑内DA、DOPAC、HVA含量增加，小鼠肢体震颤幅度缩小、震颤时间缩短。提示中药可保护黑质细胞，降低神经毒性，保护多巴胺能系统，提高内源性多巴胺含量。陈建宗等以MPTP建立帕金森小鼠模型，用培补肝肾中药(枸杞子、何首乌、肉苁蓉)后，小鼠黑质纹状体内DA、DOPAC、去甲肾上腺素(NE)、HVA、5一HT含量上升，说明其可使DA耗竭减少。张如意等以6-OHDA制备帕金森大鼠模型，以健行颗粒(白芍、天麻、钩藤、何首乌等)灌胃后，观察到大鼠脑纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量，黑质致密部TH阳性神经元数目均升高，提示健行颗粒可减轻黑质内多巴胺神经元的损害。耿百乐等用6一OHDA制成帕金森大鼠模型，以中药抗颤宁(天麻、白芍、龟板、黄芪、厚朴、茯苓、川芎、鸡血藤、当归、甘草)灌胃2周后，大鼠脑纹状体中DA、DOPAC、HVA含量均升高。周素方等以MPTP制作帕金森小鼠模型，六味地黄丸灌胃4周，发现小鼠行为改善，黑质致密部TH阳性神经元数量升高，提示它有多巴胺神经元保护作用。鲍晓东等以MPTP诱导帕金森小鼠模型，以平帕汤(银杏叶、肉苁蓉、罗布麻、山梗菜)灌胃，检测小鼠脑纹状体内DA、DOPAC含量升高、DA／HVA比例升高，黑质TH阳性细胞表达增多，提示其有保护多巴胺神经元作用。杨明会等以6．OHDA制成帕金森大鼠模型，以中药补肾活血饮(山萸肉、石菖蒲、
肉苁蓉、何首乌、当归、丹参、蜈蚣等)灌胃8周后，检测到大鼠中脑毒碱乙酰胆碱受体(M5受体)mR．NA的表达升高，增加乙酰胆碱对多巴胺能神经元的兴奋作用，促进多巴胺能神经元释放多巴胺，还可使大鼠黑质TH阳性细胞数目增加，黑质孤儿核受体(Nurrl)mRNA表达升高，Nurrl与神经前体细胞向多巴胺能神经元方向分化成熟密切相关，它使多巴胺合成增加。
    多数医家在复方和单味中药多巴胺保护作用的研究选取指标类似，只有少数选取指标不同，但是均有代表性，很好的阐述中药有多巴胺神经元保护作用，但是由于复方成分复杂，如何发挥作用难以明确，这也是今后努力方向之一。
3抗凋亡作用
    凋亡是一种生理或病理条件下由基因调控的，在进化过程中高度保守的细胞死亡程序。一旦调节失控就会出现各种疾病，细胞凋亡在DA能神经细胞死亡中起到重要作用，是PD发病的重要环节。许多基因及其产物通过多种机制参与多巴胺能神经元变性的凋亡过程，如半胱氨酸蛋白酶(cysteteine protease，caspase)、BCL-2、P53、生长抑制和DNA损伤诱导基因153(groeth arrest and DNA damage in—ducible gene 153，GADDl53)等，中药在抗细胞凋亡方面发挥一定作用。
3．1单味中药或其提取物
    人参皂苷是人参的主要成分，杨海东等观察到人参皂苷可使MPTP所致的帕金森小鼠TH阳性细胞数目、DA、DOPAC、HVA含量，BCL-2 Mrna、TH—mRNA的表达升高，半胱氨酸蛋白酶．3
(caspase-3 mRNA)、Bax．mRNA的表达降低，说明人参皂苷Rgl对多巴胺神经元有保护作用、对黑质神经元凋亡有阻断作用。蒙国光等发现人参皂苷Rgl可使MPTP小鼠黑质内TH阳性细胞数增加、葡萄糖调节蛋白(GRP-78)、caspase一12、caspase-3表达下降，抑制MPTP小鼠内质网应激(ERS)，有抗多巴胺神经元凋亡的作用。金凤等以6一OHDA建立帕金森模型大鼠，白藜芦醇可减轻模型鼠黑质多巴胺能神经元变性，抑制大鼠黑质中Caspase-3 mRNA的表达、抗凋亡。白藜芦醇是从中药虎杖、决明子中提取的有效成分，吴冰冰等发现白藜芦醇对帕金森模型大鼠超微结构损伤有改善作用，使模型大鼠黑质中线粒体跨膜电位升高，在一定程度上阻止大鼠黑质神经元细胞凋亡。王虎等发现应用肉苁蓉中提取物可以降低GADDl53的mRNA和蛋白水平，起到抗凋亡作用。李宏伟等通过C57BL／6小鼠腹腔注射百草枯和代森锰制成一PD小鼠模型，给予川芎嗪注射液腹腔注射10天，观察到PD小鼠TH阳性细胞数目增多，糖原合成酶(GSK-3B)的表达下降，说明川芎嗪通过抑制GSK-38的表达，抑制黑质细胞神经元的凋亡。葛根中含有葛根异黄酮，万永刚等实验发现葛根对MPP+损伤PCI2细胞PD模型有干预作用，可抑制其P53 mRNA的升高，减少神经元的丢失，牛英才等发现葛根可使PCI2细胞PD模型的BCL-2 mRNA的表达上调、Bax的表达下降，对PCI2细胞的凋亡有抑制作用
3．2成方或组方
    何建成等以6．OHDA制成帕金森大鼠模型，天麻钩藤饮灌胃2周，中药组染色TUNEL染色阳性细胞核数量较模型组减少，Bcl-2升高、Bax降低，电镜显示中药组神经细胞病理变化较模型组轻，提示天麻钩藤饮通过抗氧化应激，升高Bcl-2、抑制Bax激活而实现对多巴胺神经元凋亡抑制。接贵祥等以MPTP制备帕金森小鼠模型，给予乌鸡白凤丸后，观察到黑质神经元TH免疫细胞数目、DA、DOPAC、HVA含量升高，Bax蛋白表达下降，提示其有抗黑质多巴胺神经元损伤、抗凋亡作用。孙红梅等L43-~1以银杏平颤方(银杏叶、金银花、黄连、黄芪、熟地、葛根、红景天、白芍、天麻、钩藤、生甘草)及其拆方观察帕金森小鼠脑内线粒体酶复合体活性，应用此药14天、28天后，小鼠脑线粒体酶复合体I、Ⅳ活性较用中药前升高，提示其可抑制线粒体酶复合体活性下降，维持线粒体功能，阻止多巴胺神经元凋亡，可使黑质致密部TH阳性神经元丢失、黑质细胞凋亡的数量减少。吕娥等以6一OHDA制成帕金森大鼠模型，以益精养血方(龟板、生地、雄蚕蛾、蝉蜕、千年健、木瓜、白芍、刺五加、生龙齿、竹茹、蜈蚣、白花蛇、红花、炙甘草)灌胃30天，检测大鼠脑内黑质TH阳性细胞数目增多，黑质神经元Bcl-2表达升高，caspase-3表达下降，说明其有抑制细胞凋亡作用。王亚丽等以6-OHDA制成帕金森模型，舒筋解毒方(丹参、白芍、熟地、全蝎、鸡血藤等)灌胃，检测黑质纹状体Bcl-2／Bax mRNA的分布及表趋势，结果显示Bcl-2 mRNA表达增加，BaxmRNA表达受抑制，Bcl-2与Bax蛋白表达的比值回升至正常水平，提示舒筋解毒方可影响黑质纹状体内DA神经元的凋亡。
    凋亡是帕金森发病机制中的重要环节，故中药抗凋亡的研究也有重要意义，但引起PD细胞凋亡的原因复杂，与线粒体功能缺陷和氧化应激，凋亡诱导因子，细胞色素c，金属离子，caspase等多种因素有关，众医家选取的指标可能不同，研究的侧面不同，但均可以说明中药有一定的抗凋亡作用。
4  小结
    帕金森西药治疗的副作用且长期应用疗效的下降，寻找新的治疗成为帕金森病治疗的目标之一。近年来中医药对于帕金森病的实验研究颇多，在治疗帕金森病方面有很好的优势及独到的经验，中医药可以改善帕金森症状，减轻西药副作用，在一定程度上有抗氧化、抗凋亡、保护多巴胺神经元等作用。研究多集中在单药、复方上，单味中药在治疗PD方面可能有一种或多种作用，其在治疗PD上发挥哪些作用的研究尚不全面，临床患者病情复杂，单药临床治疗上有其局限性，复方可随症加减，更适合患者具体情况，由于复方成分复杂，作用机理发杂，同一方剂具有多重治疗作用，如何有效发挥治疗帕金森病的机理尚不十分明确，只是根据检测指标来推断其如何发挥作用，对其治疗机理描述尚不全面，对于中药复方如何发挥其治疗作用是中医药实验研究的目标之一。
    在实验方面常选择大鼠、小鼠作为实验动物，以MPrrP、6—0HDA、鱼藤酮等造模，这些模型虽可以模拟帕金森的一些典型症状，但是难以描述帕金森的慢性病程、有些无帕金森病特征性改变如Lewy小体，转基因模型在病理特征、发病特点和症状上与人类帕金森病高度相似，但是由于价格等多方面原因，未广泛应用。目前尚无完全符合人类疾病渐进过程、典型症状、典型病理改变、周期短、经济实惠的模型，如何选择从模型、实验过程、实验指标设计、作用机理上完全符合人类帕金森病的实验，以便于更好、更全面的阐述治疗帕金森病的机理，也是中医药治疗帕金森病今后努力的方向。
 

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