华蟾素注射液治疗原发性肝癌研究进展

   华蟾素注射液(以下简称华蟾素)是目前应用较为广泛的蟾酥相关制剂之一，是中华大蟾蜍和黑框蟾蜍皮经科学方法提取加工制成的水溶性制剂，具有解毒、消肿、止痛之功，目前主要用于治疗中晚期肿瘤、慢性乙型肝炎等疾病。现从临床应用和实验研究方面综述近年来有关华蟾素治疗原发性肝癌的研究进展。

1  临床研究

1．1  对瘤体疗效的影响樊新星等[1]通过Meta分析评价华蟾素注射液联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗肝癌的疗效与安全性，共纳入8篇文献，619例患者，均为中晚期肝癌。Meta分析结果显示，经静脉滴注华蟾素联合TACE治疗后对瘤体的缓解率优于对照组(P<0．05)，患者1年存活率、2年存活率和生存质量提高率也均高于对照组(P<0.05)。

    曾柏荣等[2]观察华蟾素经静脉滴注、肝动脉介入序贯给药治疗原发性肝癌的临床疗效，将69例原发性肝癌患者随机分为治疗组、对照l组及对照2组(各23 例)；治疗组予肝动脉华蟾素灌注栓塞，栓塞前后各静脉滴注华蟾素l4天；对照l组予单纯肝动脉华蟾素灌注栓塞，对照2组予肝动脉灌注5一Fu、DDP、THP—ADM 联合介入栓塞。结果显示，治疗组与对照l组、对照2组近期有效率分别为78．26％、47．83％、43．48％，治疗组明显高于对照组(P<0．05)。

    吴锦燕[3]观察药盒灌注华蟾素注射液联合经肝动脉化疗栓塞术治疗肝癌的临床疗效，将不能手术的60例晚期肝癌患者随机分为治疗组和对照组(各30例)，均采用经皮左锁骨下动脉穿刺植入药盒治疗，术中行规则性化疗或碘油化疗乳剂栓塞；术后第7天起治疗组药盒内灌注华蟾素，对照组静脉滴注华蟾素，两组均隔日l次，25天为1个疗程，l个疗程结束后评定疗效。结果显示，治疗组总有效率为90％，对照组总有效率为73％，两组比较差异有统计学意义(P<0．05)。

    陈挺松等[4]探讨TACE联合经皮肝穿刺门静脉置管持续灌注华蟾素注射液治疗原发性肝癌的价值，对16例确诊为原发性肝癌的患者，先行超选择性肝动脉化疗栓塞，术后予护肝等治疗；7天内在超声引导下行经皮肝穿刺门静脉置管持续灌注化疗，灌注药物为华蟾素注射液，间隔4～6周重复上述治疗，每例治疗2～3个周期。结果：肿瘤完全坏死者6例(37．5％)，明显缩小者5例(31．25％)，稳定者2例(12．5％)，无效3例(18．75％)。

薛玉玲等[3]观察华蟾素瘤体内局部注射治疗原发性肝癌的近期疗效，将80例原发性肝癌患者随机分为华蟾素组(24例)、无水乙醇组(28例)、联合组(28例)，在CT或B超引导下经皮穿刺，于瘤体内分别注射华蟾素、无水酒精及华蟾素联合无水酒精。结果显示：华蟾素组、无水乙醇组、联合组总有效率分别为37.5％、42．86％和71．43％；联合组疗效优于华蟾素组和无水乙醇组(P<0．05)，华蟾素组和无水乙醇组比较差异无统计学意义(P>0．05)。

1．2对生存期的影响薛骞等[6]将62例原发性中晚期肝癌患者随机分为治疗组32例与对照组30例，分别予华蟾素+TACE治疗和单纯TACE治疗。结果显示，治疗组、对照组1年生存率分别为56．25％、43．3％．2年生存率分别为43．7％、23．3％，组间比较差异有统计学意义(JP<0．05)。

    文华长等[7]选择50例肿瘤直径大于5cm的原发性肝癌患者；华蟾素组25例予超声引导下经皮肝穿刺注射华蟾素，无水乙醇组注射无水乙醇，药物注射剂量根据药物在肿瘤内弥散情况及瘤体大小而定，直到B 超见药物弥散至肿瘤周边为止；每次治疗时间40～60 min，7天治疗1次，4次为l个疗程，共2个疗程。结果显示，华蟾素组6、12、18和24个月生存患者分别为23、13、4、2例，无水乙醇组分别为l9、12、2、1例，组问比较差异有统计学意义(P<0．05)。

    马英杰[8]将80例中晚期原发性肝癌患者随机分为治疗组40例与对照组40例；对照组予口服水飞蓟宾、维生素C、复合维生素8，静脉滴注还原型谷胱甘肽；治疗组在一般治疗的基础上，加用华蟾素注射液静脉滴注；两组均以l5天为l个疗程，间隔2周后再行下一个疗程。结果显示，治疗组12个月生存率为30．o％，高于对照组的l7．5％(P<0．05)；治疗组肿瘤恶化率为l7．5％，低于对照组的30.0％(P<0．05)。

1．3对生活质量的影响  付志龙等[9]将l58例中晚期肝癌患者随机分为治疗组和对照组(各78例)，均采用TACE治疗，每月1次，重复3次以上，治疗组另外联合华蟾素静脉滴注。结果显示，治疗组KPS评分提高42例(53．8％)，对照组提高22例(28．2％)，组间比较差异有统计学意义(P<0．05)。

    倪秉强等[10]将65例晚期肝癌患者分为治疗组33 例及对照组32例，均予保守支持治疗；治疗组另外联合华蟾素静脉滴注，每日1次，l4天为l个疗程，观察患者生活质量、临床症状及体质量变化情况?结果显示，治疗后治疗组与对照组KPS评分分别为(60．0±7．5)分及(50．0±5．8)分，组问差异有统计学意义(P<0．01)；治疗组腹胀、纳差、乏力等临床症状改善率为72．8％，对照组为40．6％，组问差异有统计学意义(P<0．01)；治疗组体质量有效率(稳定+增加)为66．7％，对照组为37．5％，组问差异有统计学意义(P<0．01)。

    王志超等[11]治疗35例中晚期肝癌，予华蟾素静脉滴注，每日1次，l4天为l个疗程。结果显示，生活质量改善13例，稳定l6例，恶化6例，总有效率为82．86％；腹胀减轻者达45．71％，食欲增加者达34．28％，肝区疼痛减轻者达25．71％，腹水减少者达22．86％。

1．4对相关指标的影响张小玉等[12]将60例原发性肝癌患者随机分为治疗组及对照组(各30例)，均给予立体定向体部伽玛刀治疗，每日l次，连续照射3天后休息l天，疗程l0～15次，治疗组另外联合华蟾素静脉滴注。结果显示，两组治疗后WBC、ALT、TB及AFP指标比较差异均有统计学意义(P<0．05)。

    袁春意等[13]将40例原发性肝癌患者随机分为治疗组和对照组(各20例)，治疗组予肝动脉灌注华蟾素+碘化油栓塞，对照组予肝动脉灌注5-Fu+DDP+EPI +碘化油化疗栓塞，每月l次，共治疗2个疗程。结果显示：治疗组AFP下降率为65．o％，对照组为40．o％；治疗组治疗后CD3、CD4、NK水平均较对照组高(P< 0．05)。

    黄智芬等[14]将60例晚期原发性肝癌患者随机分为治疗组及对照组(各30例)，两组均给予相同的西药对症支持治疗，治疗组另外联合华蟾素静脉滴注，共治疗2个疗程。结果显示，治疗后治疗组较对照组CD3、CD4、CD8、CD4／CD8显著提高(P<0．05)。

2实验研究

2．1  抑制癌细胞生长，诱导凋亡郑培实等[15]观察华蟾素对肝癌细胞株SMMC一7721增殖、凋亡的影响，将肝癌细胞株SMMC．7721分为实验组及对照组；实验组加入不同剂量的华蟾素，对照组不加药，观察24 h、48 h 细胞增殖抑制率及凋亡率。结果显示，实验组肝癌细胞增殖抑制率及凋亡率均明显高于对照组(P<0．05)。

    左小安等[16]通过华蟾素诱导体外肿瘤细胞凋亡的研究，证实华蟾素可抑制肝癌细胞增殖及诱导肝癌细胞凋亡，且具有浓度和时间依赖性；最佳的药物浓度为0．12 m9／L，最佳诱导时间为20 h左右。

    Li H等[17]进行Bufalin肿瘤抑制能力体外实验，证实华蟾素能有效抑制肝癌细胞的生长，但肝癌细胞对华蟾素敏感性存在较大差异。Na+／K+一ATPase a3型是华蟾素抑制肝癌细胞生长的一个重要靶点，华蟾素是通过与其结合并抑制其活性而发挥抗肝癌细胞生长的作用，但Na+／K+-ATPase a存在四种异构体，且四种异构体在ttNA及蛋白水平表达上存在差异。

2．2抑制肿瘤血管生成刘琳等[18]。观察三氧化二砷联合华蟾素对裸鼠人肝癌移植瘤血管新生的作用。建立裸鼠肝癌原位移植瘤模型，随机分为0．9％NaCl溶液组(对照组)、三氧化二砷组、华蟾素组、三氧化二砷联合华蟾素组(联合组)，比较各组肿瘤微血管密度、移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)及移植瘤病理变化情况。结果显示，三氧化二砷和华蟾素均能抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达，并可降低肿瘤微血管密度，两药联合后上述作用均显著增强(P<0．05)。

 2．3  干扰细胞周期，抑制肿瘤细胞DNA合成  孙宇等[19]观察华蟾素注射液对人肝癌HepG一2细胞增殖及周期的影响。研究结果发现，华蟾素注射液可明显抑制HepG一2细胞的增殖，其抑制作用具有时问和剂量依赖性；可将HepG-2细胞阻滞于s期，抑制HepG一2细胞CDK2、CyclinA mRNA表达，使HepG-2细胞CyclinA、CDK2活性降低(P<0．05)。

2．4改善免疫崔智[20]观察华蟾素注射液联合化疗对小鼠原位移植H22肝癌的影响。将40只BALB／C小鼠随机分为模型组、单纯化疗组(5一Fu)、华蟾素注射液组和化疗(5一Fu)+华蟾素注射液组，每组l0只，进行原位移植t]22 肝癌造模，给药结束第3天摘取胸腺组织计算胸腺指数。结果显示，华蟾素注射液组胸腺质量(82±12)9、胸腺指数(36±13)，较其他各组差异有统计学意义(P<0．01)。

2．5  增强杀伤细胞活性  蒋淑莲等。21。观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用。采集健康供者的外周血诱导培养CIKC，将华蟾素加入CIKC，检测华蟾素处理组及未处理组CIKC杀伤BEL7402肝癌细胞株的活性。结果显示，华蟾素加入培养后，CIKC细胞群的CD3／CD8、CD3／CD56细胞比例和杀伤活性较单纯的CIKC更高，较未处理组差异有统计学意义(P<0．01)。

3小结

    在有循证医学依据的能延长原发性肝癌患者生存期的治疗方法中，常用的有手术治疗(切除、肝移植)、局部治疗(经肝动脉化疗栓塞、射频消融、经皮乙醇注射及放射治疗)、系统治疗(索拉非尼)等，以奥沙利铂为主的化疗方案在肝癌的系统治疗中也具有潜在的应用前景。但是，仍有一部分患者无法从这些治疗方案中获益，而此类患者可能从华蟾素治疗中获益。

    综合近年来的有关文献，有关华蟾素注射液的应用方式主要以静脉滴注为主，在此基础上，或结合TA- CE，或联合放射治疗；其他的应用方法还有肝动脉内直接灌注，或瘤体内注射。临床观察结果表明，华蟾素可以起到稳定瘤体、减轻肿瘤负荷、延长生存期、提高生活质量以及降低AFP、改善肝功能和免疫状态等作用。另外，华蟾素注射液联合其他治疗方法，在增加疗效的同时还可以减轻其他治疗方法带来的不良反应，值得推广。

    实验研究结果表明，华蟾素在抑制肝癌细胞生长、促进肝癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、干扰细胞周期、抑制肿瘤细胞DNA合成、改善免疫功能、增强杀伤细胞活性等方面有一定的作用，并且多项研究表明其抗肝癌功效具有时间及浓度依赖性。但目前的报道多为体外的细胞学实验，缺乏系统性，更缺乏与临床紧密结合的基础研究。

    目前临床研究存在的主要问题是多数试验样本量较小，大多为单中心、非随机临床观察，结局指标记录不完整也是一个共性问题，缺乏符合循证医学要求的高质量的试验，证据强度较弱。今后需要按照循证医学的要求，进行多中心、随机对照研究，以进一步验证华蟾素的临床疗效，寻找适宜人群、恰当的给药方式和最佳剂量，在此基础上结合临床基础研究和动物实验研究深入探讨其作用机制。

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