罗勒是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之一,是唇形科罗勒属植物Ocimum basilicum L。主要成分:全草,罗勒的化学成分主要为挥发油、黄酮、香豆素、甾体化合物等,其中挥发油的含量最大。本研究是通过罗勒在体外对环氧化酶(COX一1和COX一2)活性的影响来探讨罗勒抗血栓的作用机制,给临床选药组方提供理论依据。
l材料与方法
1.1仪器与材料
CO2培养箱,全自动酶标仪,生物显微镜,超净操作台。
罗勒,阿司匹林,吲哚美辛;脂多糖(LPS)、花生四烯酸(AA);DMEM干粉;RPMll640;小牛血清(四季青); MTT、胰蛋白酶;6一keto—PGFlα和PGEzELISA试剂盒。
1.2方法
1.2.1在体外对COX—l的影响
按文献方法制备内皮细胞COX一2模型。将培养至第4代的内皮细胞接种于24孔培养板中生长融合,再加入罗勒提取液,使其终浓度分别为O.1mg/mL、lmg/mL、10mg/mL,或非选择性环氧化酶抑制剂阳性对照阿司匹林(终浓度10-6mol/L)、COX一2抑制剂阳性对照吲哚美辛(终浓度10-Tmol/L)或阴性对照溶媒。37℃、5%CO2培养箱培养24h,取出每孔加入底物花生四烯酸,使其终浓度为10t~mol/L,37~C继续培养20min。收集上清液,一20~C冻存待测[5],用ELISA法测定样品中6一keto—PGFlα。1.2.2在体外对COX一2的影响
按文献方法制备巨噬细胞COX一2模型,将细胞接种于24孔板中生长融合,再加入一定浓度的罗勒提取液,终浓度分别为O.1mg/mL、lmg/mL、10mg/mL,或阳性对照品阿司匹林(终浓度10-6mol/L)、吲哚美辛(终浓度10-7 mol/L)或溶媒。37℃、5%C02培养箱培养24h,取出,每孔加入底物花生四烯酸(终浓度10#mol/L),37~C继续培养20min。收集上清液,一20~C冻存待测。用ELISA法测定样品中的PGEz。
1.2.3统计学处理
数据用SPSS统计软件处理,所有结果用x±s表示,采用独立样本t检验和方差分析。2结果
罗勒在体外对环氧化酶的影响,罗勒对环氧化酶一1(COX一1)和环氧化酶一2(COX一2)都有不同程度的抑制作用,另外,随着剂量的增加抑制率也增大,存在一定的量效关系。
3讨论
环氧化酶(COX)是花生四烯酸合成前列腺素过程中一个重要的限速酶,其催化的产物前列腺素H2是各种前列腺素的共同中间体,在各组织和器官中前列腺素H2被不同的前列腺素合成酶作用生成各种前列腺素,以自分泌或旁分泌方式和靶细胞的前列腺素受体结合发挥各种各样的生理功能。随着COX一2的发现,现在普遍认为COX一1负责维持身体的正常机能,而COX一2则是一种诱导酶,参与炎症反应,抑制COX一2可以发挥抗血栓作用[8]。本实验表明,罗勒在3个剂量都对COX一2有抑制作用,并随剂量的增加而作用增强,抑制环氧化酶可能是其抗血栓的作用机制之一。
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