少年红矾杏平喘糖浆的镇咳平喘作用研究
土家药少年红矾杏平喘糖浆(以下简称“平喘糖浆”)主要由少年红、明矾、杏仁、土细草、炙麻黄、洋金花、葶苈子、麻黄根、石膏、鱼腥草、南天竹等组成，临床用于支气管哮喘。将该药煎液按国家药典糖浆标准配制成平喘糖浆，从镇咳、祛痰、平喘三个方面对其进行相关药效学研究。1材料与方法1．1材料1．1．1药物与试剂：平喘糖浆(由思施州中心医院提供，每lml糖浆含主要药物洋金花2 mg)；25％氨水(南京化学试剂一厂，批号：021230493)；磷酸可待因片(青海制药厂有限公司，15 mg，片；批号：20061244)；桂龙咳喘灵胶囊(桂龙药业有限公司，0．3 g，粒；批号：071009)；氯化铵溶液(广州军区武汉总医院，100 ml：10g；批号：080507)：磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司；批号：080620)；氯化乙酰胆碱(上海三爱思试剂有限公司：批号：20030527)；盐酸异丙肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，2IIIl：1 mg；批号：070102)；氨茶碱注射液(常州兰陵制药有限公司，10 ml：0．25 g；批号：0704161)。1．1．2仪器：402AI型超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备有限公司)；UV-1240紫外可见分光光度计(日本岛津)；AS-HI-II型恒温平滑肌浴槽(成都遨生电子有限公司)；BL-420生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司生产)；JH-2肌张力传感器(航天医学工程研究所)。1．1_3动物：SPF级昆明种小鼠，18～22g，雌雄各半；豚鼠，200～350 g，雌雄不限。以上动物均购自湖北省实验动物研究中心，合格证号：SCXK 2003-2005。
1．2方法1．2．1豚鼠药物引喘实验：①动物筛选…：实验前1天，将豚鼠40只，分别置于干燥器内，以最大喷雾量将O．2％磷酸组胺喷入容器内，15 s后停止喷雾，继续密闭干燥器观察。动物吸入药液后经过一定的潜伏期，产生哮喘反应。“哮喘”反应按程度分4级：I级：呼吸加速；1I级：呼吸困难；IⅡ级：抽搐；Ⅳ级：翻到。多数动物在90 s内即可出现IⅡ级或Ⅳ级反应；超过150 s不出现反应者认为不敏感，不予选用。动物一出现抽搐或翻到，立即取出，必要时辅以人工呼吸，以免窒息死亡。②正式实验：次日取预先筛选的合格豚鼠40只，雌雄各半，分为5组，各8只，即空白对照组(平喘糖浆赋形剂)、平喘糖浆低剂量组(8 mg／kg)、平喘糖浆中剂量组(16 mg／kg)、平喘糖浆高剂量组(32 mg／kg)和氨茶碱组(50 mg／kg)。各组豚鼠按体重10 ml／kg灌胃给药，1次，d，连续灌胃5 d，其中空白对照组给等体积平喘糖浆赋形剂。末次给药后1 h，将豚鼠置于干燥器内，用0．2％磷酸组胺以最大喷雾量喷雾15 s致喘，记录各组喷雾开始至症状(以抽搐、翻倒为准)出现的时间作为引喘潜伏期。一般观察时间不超过360 s，超过360 s仍不抽搐或翻倒者，以360 s计算引喘潜伏期。1．2．2豚鼠气管螺旋条实验：取豚鼠8只，击头处死，开胸，摘取气管置于冰克一亨氏液中，通氧，修剪标本后剪成螺旋条，将2 em长螺旋条悬挂于37*C的恒温平滑肌浴槽中，上端连接张力换能器，张力换能器接生物机能实验系统。给予37~C冰克一亨氏液，并持续给氧，以1．5 g的静止张力平衡约印min，期间每隔15 min更换一次营养液，待标本稳定后记录一段正常曲线作为基点。加入致痉剂乙酰胆碱(浴槽内浓度为4×10一'g／rra)于气管条张力达到最高点并稳定3～5 rain后，分别加入糖浆赋形剂、平喘糖浆、盐酸异丙肾上腺素，观察并记录气管条张力变化，按下式求出受试药的解痉率[解痉率(％)=(给药前曲线高度一给药后曲线高度，给药前曲线高度)×100]。1．2．3小鼠氨水引咳实验：取昆明种小鼠60只，分为6组，各10只，即空白对照组(平喘糖浆赋形剂)、平喘糖浆低剂量组(8 mgacg)、平喘糖浆中剂量组(16 mg／kg)、平喘糖浆高剂量组(32 mg／kg)、桂龙咳喘灵组(2．5 g／kg)和可待因组(2 mg／kg)。各组小鼠按体重0．1 ml／10 g灌胃，1次，d，连续5 d，其中空白对照组给等体积平喘糖浆赋形剂。末次给药后1 h，将小鼠放入干燥器中，接受最大雾量的25％氨水刺激引咳，刺激时间对数的间距为0．1，刺激停止后立即取出小鼠，观察 min内咳嗽次数。咳嗽标准以小鼠腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴为1次，l min内咳嗽>3次为阳性，≤3次为阴性。用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(ED／'50)，计算R值[R(％)=(给药组ED／'50／空白对照组ED T50)×100]。若R值大于130％，表明药物有止咳作用；R值大于150％，表明有显著止咳作用。计算公式ED T50=log—lc／n，式中，l为动彩数，c为r、x值的总和，r为每剂量组的动物数，x为剂量(即喷雾时间)的对数。1．2．4小鼠酚红祛痰实验…：取昆明种小鼠50只，分为5组，各10只，即空白对照组(平喘糖浆赋形剂)、平喘糖浆低剂量组(8 mg／kg)、平喘糖浆中剂量组(16 mg／kg)、平喘糖浆高剂量组(32 mg／kg)和氯化铵组(1 g／kg)，其他每组剂量同氨水弓咳实验。各组小鼠按0．1 inl／g体重灌胃给药，1次，d，共5 d，空白对照组给等体积平喘糖浆赋形剂。末次给药1 h后，腹腔静脉注射0．5 g／dl酚红溶液0．5 Inl，注射后半小时脱颈椎处死小鼠，仰位固定于手术板上，剪开颈正中皮肤，分离气管，于喉头下将磨平的7号针头插入气管约0．3 cm，用丝线结扎固定后，用l Illl注射器吸取5 g／dl NaHC03溶液0．5 m1，通过针头灌洗呼吸道3次(每次不作停留)，将灌洗液注入比色管中，重复灌洗3次后收集洗液于分光光度计546 nm处测定OD546值，相据回归方程计算出酚红的含量。2结果2．1对组胺致喘豚鼠模型的平喘作用
由表1可见，阳性药物氨茶碱组与给药前、空白对照组比较均有显著性差异(P<0．01)，表明氨茶碱有平喘作用。平喘糖浆低、中、高剂量组均能延长引喘潜伏期，与给药前比较均有显著性差异(P均<0．01)；与空白对照组比较亦均有显著性差异(P<0．01)，表示平喘糖浆有明显的平喘效果。2．2对豚鼠模型气管螺旋条的解痉作用
由表2可见，阳性药物盐酸异丙肾上腺素组在浴槽终浓度为2．5×10 mg／ml时即有显著解痉作用，与空白对照组比较有显著性差异(P<0．01)。平喘糖浆低、中、高剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P均<0．01)，表明平喘糖浆有拮抗乙酰胆碱的收缩气管、缓解豚鼠气管平滑肌痉挛的作用；平喘糖浆低、中、高剂量组的浴槽内终浓度之间呈3倍关系，解痉率也存在浓度依赖性，随着平喘糖浆浓度的增加而增高。2．3对氨水引发小鼠咳嗽的止咳作用
由表3可见，平喘糖浆低、中、高剂量组R值分别为138％、145％、148％，均大于130％，表示给药组均有止咳作用，且止咳作用随剂量增加而增大，显示出较好的剂量依赖性。桂龙咳喘灵组和可待因组的R值均大于150％，表示阳性药物组均有显著止咳作用。2．4对小鼠气管酚红排泄量的影响
从表4可见，较空白对照组，平喘糖浆低、中剂量组对小鼠气管酚红排泄量无明显影响；高剂量组则明显增加(P<0．05)，表明平喘糖浆高剂量组有显著祛痰作用。阳性对照药氯化铵组能显著增加酚红排泄量，较空白对照组有显著性差异fP<n n1)。
3讨论
哮喘是一种发作性的痰鸣气喘疾病，发作时喉中哮鸣有声，呼吸气促困难，甚则喘息不能平卧。哮喘发生与“本虚”及“标实”有关，本虚与肺脾肾三脏有关，尤以肾阳虚为主，标实不外风、寒、痰、瘀、湿几种因素。哮喘的病因尚不十分清楚，一般认为是与多基因遗传有关的变态反应性疾病，环境因素对发病起重要作用。现代研究认为，支气管哮喘是人对生态环境适应性调节功能失调性疾病，而“适应原样”的中药可稳定机体环境和恢复人体本身适应能力，因而具备良好的治疗缓解哮喘的作用。
“麻杏石甘汤”由麻黄、杏仁、石膏、炙甘草组成，研究表明，麻杏石甘汤有膜保护作用，可阻止肥大细胞脱颗粒释放介质，用于治疗肺热咳喘。“三拗汤”源于《太平惠民和剂局方》，方中麻黄发汗散寒、宜肺平喘；杏仁肃降肺气、止咳化痰；甘草和中解毒，协同麻、杏利气祛痰。三药相配，可疏风宜肺、止咳平喘。少年红矾杏平喘糖浆是在麻杏石甘汤、三拗汤基础上，配合土家药少年红加减而成。将药物煎液按国家药典糖浆标准配制成平喘糖浆，方中少年红为君，明矾、洋金花、麻黄等为臣，杏仁、土细草、洋霍叶为佐，甘草为使。宣肺而不助热，清肺不留邪，攻不忘补虚，改善肺部微循环及弥散功能，稳定机体环境、恢复人体本身适应能力，具有良好的镇咳、祛痰和平喘作用。
洋金花含有多种莨菪烷类生物碱，特别是东莨菪碱含量较高，具有平喘止咳、镇痛和解痉作用；少年红为紫金牛科植物少年红全株，始载于《新华本草纲要》，具有“止咳平喘、化瘀消肿”之功效；明矾又名白矾，具有清热消痰的功效；杏仁中含苦杏仁苷及苦杏仁酶，内服后苦杏仁苷可被酶水解产生氢氰酸和苯甲醛，小量服用能在体内慢慢分解产生微量的氢氰酸，镇静呼吸中枢，使呼吸趋于安静、镇咳平喘：此外，杏仁还能提高血中表皮生长因子，修复呼吸道黏膜与屏障，恢复呼吸道的正常功能；麻黄的主要成分麻黄碱具有持久扩张支气管作用，特别对于解除支气管急性痉挛作用更显著。南天竹为小檗科南天竹属植物，根据《贵州民间方药集》，南天竹具有“镇咳止喘”的功效。
本研究用组胺或乙酰胆碱等收缩支气管药以气雾法使豚鼠吸入，引起豚鼠呼吸急促、喘息、甚至窒息，进而导致抽搐、跌倒等，制作豚鼠哮喘模型，用于观察药物的平喘作用。气雾喷入封闭器皿固定时间后，豚鼠从喷雾到抽搐、跌倒的时间越长，则药物的平喘效果越好，反之亦然。本实验通过比较给药组和空白对照组、给药后的引喘潜伏期变化，判断药物是否具有平喘作用。结果表明，与给药前和空白对照组相比，平喘糖浆低、中、高剂量组均能明显延长引喘潜伏期，表明平喘糖浆平喘效果明显。豚鼠气管对药物的反应较其他动物敏感，通常将豚鼠致死后取出气管剪成螺旋条。气管螺旋条含纵、横或环状肌，任何～种肌肉收缩，均可通过肌力换能器，将药物对气管条所产生的张力变化转化为电讯号，经放大后，由系统记录出气管螺旋条的舒缩曲线。乙酰胆碱可通过激动M受体使支气管平滑肌收缩、气道缩小，因此可用乙酰胆碱制作豚鼠离体气管螺旋条致痉模型。待气管螺旋条的收缩达到最大幅度时，加入受试药物，即可通过气管的收缩或者舒张程度判断受试药的解痉作用。本研究结果显示，与空白对照组相比，平喘糖浆能降低乙酰胆碱致痉的气管张力，缓解气管平滑肌痉挛，提示平喘糖浆具有平喘作用。
浓氨水是一种较强的化学刺激物，小鼠吸入氨水气雾后，能充分弥散于呼吸系统，刺激呼吸道上皮下的感受器引发咳嗽。给药后的小鼠经雾化氨水刺激后，出现反射性咳嗽的时间越长，提示药物的镇咳作用越为明显。本实验通过序贯法求出低、中、高剂量平喘糖浆组R值均大于130％，提示平喘糖浆确有较好的止咳作用。
祛痰的作用原理大多为增加呼吸道分泌，使痰液变稀；或降低痰液中的黏性成分；或增加呼吸道黏膜上皮细胞纤毛的运动，使痰液易于咳出。小鼠酚红祛痰实验利用酚红作为祛痰效果指示剂，通过检测灌洗液的0D546值，即可得到酚红浓度，从而判断支气管分泌液的排出量。本结果中，平喘糖浆高剂量组的气管排泄量明显增加，表明大剂量的平喘糖浆有显著祛痰作用。
上述实验证实，平喘糖浆在体内平喘实验和离体气管平滑肌实验中均表现较强的平喘、抑制气管平滑肌收缩作用，对氨水引起的咳嗽有较好的止咳作用，高剂量组对于正常动物有祛痰作用。
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