甘肃引种川芎的质量考察
核心提示：谢明全，韦亚洁
(兰州大学第二医院药剂科，甘肃兰州 730030)
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根茎，主要为栽培品种，具有活血行气、祛风止痛的功效。随着川芎的国内需求量逐年增加，出口量日趋增
(兰州大学第二医院药剂科，甘肃兰州 730030)
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根茎，主要为栽培品种，具有活血行气、祛风止痛的功效。随着川芎的国内需求量逐年增加，出口量日趋增
谢明全，韦亚洁
(兰州大学第二医院药剂科，甘肃兰州 730030)
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根茎，主要为栽培品种，具有活血行气、祛风止痛的功效。随着川芎的国内需求量逐年增加，出口量日趋增大，供需的不平衡刺激了川芎种植的快速发展。目前，四川省川芎产量最大且品质优良，占国内川芎总产量的80％以上。除此之外，国内已有甘肃、陕西、福建等十几个省(市)进行了人工引种，均获成功并提供了商品药材，但由于各地自然环境(土壤、气候)差别，引种技术也不尽相同，引种川芎的性状特征与原产地川芎有一定的差异，不仅造成了销路不畅，医药部门也常提出质疑，还挫伤了药农生产的积极性，甚至出现了张冠李戴的混用现象。历史上甘肃省是川芎产区之一，许多地区仍延续引种栽培习惯(习称西芎)，并形成了一定的规模。为全面了解甘肃引种川芎的质量，积极推广科学的种植方法，促进其在临床中推广应用，笔者参考文献，对甘肃引种川芎的质量进行了初步研究与评价。
1 仪器与试药
SP一8800型高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；751一GD型紫外一可见分光光度计(上海分析仪器厂)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；MetterAE 160型电子天平(瑞士)。阿魏酸对照品(批号为0773—9910)，盐酸川芎嗪对照品(批号为817—200104)，由中国药品生物制品检定所提供；川芎LigusticumChuanxiongHort．产于四川省灌县，西芎产于甘肃省华亭、康县、西和县，藁本Ligusticumsinenseoliv．产于甘肃省临夏，以上样品由甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴定。甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯；水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2．1 阿魏酸测定(高效液相色谱法)
2．1．1 色谱条件
色谱柱：YWC—C18柱(250 mm x 4．6 mm，10 μm，中国科学院大连化学物理研究所)；流动相：甲醇一5％醋酸(25：75)；流速：1．OmL／min；检测波长：320nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。理论塔板数以阿魏酸计应不低于1 500，分离度大于1．5。
2．1．2 溶液制备
取川芎、西芎、藁本研成细粉，过5号筛，精密称取细粉O．5 g，置100mL量瓶中，加甲醇一甲酸(9．5：O．5，V／V)溶解并定量至刻度，摇匀；置超声波清洗器中处理15 min后，放置过夜，取上清液，用O．45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得对照品溶液。
2．1．3 方法学考察
线性关系考察：精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，l0 IxL，分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标、进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为r=12 114X—O．618，r=0．999 8，结果表明阿魏酸进样量在0．04-0．4μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
精密度试验：精密吸取上述对照品溶液10 tzL，连续进样5次，测定峰面积。结果的RSD：1．98％，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取阿魏酸对照品溶液，分别于配制后0，2，4，6，12 h时进样10μL注入色谱仪，记录峰面积。结果其RSD=1．02％，表明阿魏酸在12 h内基本稳定。
加样回收试验：取已测知阿魏酸含量的川芎样品(四川灌县，含量为O．22 mg／g)6份，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品一定量，按供试品溶液制备项下方法操作，依法进样，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。
2．1．4 样品含量测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液lO μL，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中阿魏酸的含量。结果样品川芎(灌县)、西芎(华亭)、西芎(西和)、西芎(康县)、藁本(临夏)中阿魏酸的含量分别为0．22，0．13，O．31，0．66，O．42 mg／g(n=3)，高效液相色谱图见图l。
2．2 总生物碱测定(紫外分光光度法)
2．2．1 溶液制备
精密称取盐酸川芎嗪对照品lO mg，置100 mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，制成每l mL含0．lm真的溶液，即得对照品溶液。取上述药材，分别粉碎过20目筛，精密称取4 g，置150 mL锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声提取30 rain，冷却，用水补足失去质量，过滤，精密吸取续滤液各1 mL，分别置50mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．2．2 测定波长选择
取盐酸川芎嗪对照品溶液，以水为空白对照，于200-400 nm波长范围内测定吸收色谱图，结果在(295 t2)nm波长处有最大吸收，故以此为测定波长。
2．2．3 方法学考察
标准曲线绘制：精密吸取盐酸川芎嗪对照品溶液1，2，3，4，5 mL，分别置10mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，以水作空白，于295 nm波长处分别测定吸收度，并进行线性回归。标准曲线方程为C=2．7645Axl0-2一5．502 1 xlO-4，r=O．9995。
稳定性试验：取盐酸川芎嗪对照品溶液，于配制后每隔30 min测定1次。结果RSD：1．61％，溶液在2h内稳定。
重现性试验：取同批药材(川芎)共5份，各4只，精密称定，按供试品溶液制备方法，依法提取和测定，结果川芎中总生物碱平均含量为1．03％，RSD：2．16％。
2．2．4 样品含量测定
以水作空白，于295 nm波长处分别测定上述样品的供试品溶液吸收度，以标准曲线计算样品含量。结果样品川芎(灌县)、西芎(华亭)、西芎(康县)、藁本(临夏)中总生物碱的含量分别为1．02，1．26，1．27，1．07 mg／g(n：3)，紫外吸收光谱图见图2。
3 讨论
川芎所含的阿魏酸、生物碱受到了广泛关注，它具有明显的生理活性，是川芎的重要活性成分，已成为评价川芎内在质量的指标之一。笔者测定了四川、甘肃引种川芎(西芎)及藁本样品中阿魏酸，结果其含量有明显差别，除华亭产样品外，西芎中阿魏酸含量普遍较高，含量已达到川芎的规格水平，这可能与生长环境和不同培育品种的影响有关；所含生物碱略高于四川引种川芎及藁本。结果表明，甘肃省引种川芎(西芎)质量与四川省引种川芎相当。
《中国药业》
(兰州大学第二医院药剂科，甘肃兰州 730030)
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根茎，主要为栽培品种，具有活血行气、祛风止痛的功效。随着川芎的国内需求量逐年增加，出口量日趋增大，供需的不平衡刺激了川芎种植的快速发展。目前，四川省川芎产量最大且品质优良，占国内川芎总产量的80％以上。除此之外，国内已有甘肃、陕西、福建等十几个省(市)进行了人工引种，均获成功并提供了商品药材，但由于各地自然环境(土壤、气候)差别，引种技术也不尽相同，引种川芎的性状特征与原产地川芎有一定的差异，不仅造成了销路不畅，医药部门也常提出质疑，还挫伤了药农生产的积极性，甚至出现了张冠李戴的混用现象。历史上甘肃省是川芎产区之一，许多地区仍延续引种栽培习惯(习称西芎)，并形成了一定的规模。为全面了解甘肃引种川芎的质量，积极推广科学的种植方法，促进其在临床中推广应用，笔者参考文献，对甘肃引种川芎的质量进行了初步研究与评价。
1 仪器与试药
SP一8800型高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；751一GD型紫外一可见分光光度计(上海分析仪器厂)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；MetterAE 160型电子天平(瑞士)。阿魏酸对照品(批号为0773—9910)，盐酸川芎嗪对照品(批号为817—200104)，由中国药品生物制品检定所提供；川芎LigusticumChuanxiongHort．产于四川省灌县，西芎产于甘肃省华亭、康县、西和县，藁本Ligusticumsinenseoliv．产于甘肃省临夏，以上样品由甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴定。甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯；水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2．1 阿魏酸测定(高效液相色谱法)
2．1．1 色谱条件
色谱柱：YWC—C18柱(250 mm x 4．6 mm，10 μm，中国科学院大连化学物理研究所)；流动相：甲醇一5％醋酸(25：75)；流速：1．OmL／min；检测波长：320nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。理论塔板数以阿魏酸计应不低于1 500，分离度大于1．5。
2．1．2 溶液制备
取川芎、西芎、藁本研成细粉，过5号筛，精密称取细粉O．5 g，置100mL量瓶中，加甲醇一甲酸(9．5：O．5，V／V)溶解并定量至刻度，摇匀；置超声波清洗器中处理15 min后，放置过夜，取上清液，用O．45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得对照品溶液。
2．1．3 方法学考察
线性关系考察：精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，l0 IxL，分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标、进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为r=12 114X—O．618，r=0．999 8，结果表明阿魏酸进样量在0．04-0．4μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
精密度试验：精密吸取上述对照品溶液10 tzL，连续进样5次，测定峰面积。结果的RSD：1．98％，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取阿魏酸对照品溶液，分别于配制后0，2，4，6，12 h时进样10μL注入色谱仪，记录峰面积。结果其RSD=1．02％，表明阿魏酸在12 h内基本稳定。
加样回收试验：取已测知阿魏酸含量的川芎样品(四川灌县，含量为O．22 mg／g)6份，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品一定量，按供试品溶液制备项下方法操作，依法进样，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。
2．1．4 样品含量测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液lO μL，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中阿魏酸的含量。结果样品川芎(灌县)、西芎(华亭)、西芎(西和)、西芎(康县)、藁本(临夏)中阿魏酸的含量分别为0．22，0．13，O．31，0．66，O．42 mg／g(n=3)，高效液相色谱图见图l。
2．2 总生物碱测定(紫外分光光度法)
2．2．1 溶液制备
精密称取盐酸川芎嗪对照品lO mg，置100 mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，制成每l mL含0．lm真的溶液，即得对照品溶液。取上述药材，分别粉碎过20目筛，精密称取4 g，置150 mL锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声提取30 rain，冷却，用水补足失去质量，过滤，精密吸取续滤液各1 mL，分别置50mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．2．2 测定波长选择
取盐酸川芎嗪对照品溶液，以水为空白对照，于200-400 nm波长范围内测定吸收色谱图，结果在(295 t2)nm波长处有最大吸收，故以此为测定波长。
2．2．3 方法学考察
标准曲线绘制：精密吸取盐酸川芎嗪对照品溶液1，2，3，4，5 mL，分别置10mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，以水作空白，于295 nm波长处分别测定吸收度，并进行线性回归。标准曲线方程为C=2．7645Axl0-2一5．502 1 xlO-4，r=O．9995。
稳定性试验：取盐酸川芎嗪对照品溶液，于配制后每隔30 min测定1次。结果RSD：1．61％，溶液在2h内稳定。
重现性试验：取同批药材(川芎)共5份，各4只，精密称定，按供试品溶液制备方法，依法提取和测定，结果川芎中总生物碱平均含量为1．03％，RSD：2．16％。
2．2．4 样品含量测定
以水作空白，于295 nm波长处分别测定上述样品的供试品溶液吸收度，以标准曲线计算样品含量。结果样品川芎(灌县)、西芎(华亭)、西芎(康县)、藁本(临夏)中总生物碱的含量分别为1．02，1．26，1．27，1．07 mg／g(n：3)，紫外吸收光谱图见图2。
3 讨论
川芎所含的阿魏酸、生物碱受到了广泛关注，它具有明显的生理活性，是川芎的重要活性成分，已成为评价川芎内在质量的指标之一。笔者测定了四川、甘肃引种川芎(西芎)及藁本样品中阿魏酸，结果其含量有明显差别，除华亭产样品外，西芎中阿魏酸含量普遍较高，含量已达到川芎的规格水平，这可能与生长环境和不同培育品种的影响有关；所含生物碱略高于四川引种川芎及藁本。结果表明，甘肃省引种川芎(西芎)质量与四川省引种川芎相当。
《中国药业》
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