高效液相色谱法测定四季感冒片中连翘苷含量

　　1仪器与试药  高效液相色谱仪(L7420型可见一紫外检测器；1,7110型溶剂输送泵)：日本日立。artstar色谱工作站。连翘苷对照品：中国药品生物制品检定所，批号：110821—200401。乙腈：色谱纯．Merck公司。其它试剂为分析纯。四季感冒片(由桔梗、紫苏叶、陈皮、荆芥、大青叶、连翘、甘草、香附、防风组成)：哈高科佳木斯有限公司提供。

　　2方法与结果

　　2．1色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(200×4．6mm，5p．m)；流动相：乙腈：水(10：33)；流速：0．7ml／min；检测波长277姗。理论板数按连翘苷峰计算，不低于2500。

　　2．2供试品溶液制备精密称取四季感冒片约l9，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50km)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20ml，合并三氯甲烷液，回收至干，残渣用50％甲醇溶解，转移到10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即供试品溶液。

　　2．3对照品溶液削备精密称取连翘苷对照品适量，加50％甲醇制成每lml含2p．g的溶液。

　　2．4阴性对照溶液制备按照以上方法处理不加连翘的阴性样品(包括辅料)．得阴性供试液。

　　2．5系统适应性实验进行HPLC测定。结果表明在此条件下，连翘的阴性样品无干扰。连翘苷峰与其相邻色谱峰分离度符合规定。

　　2．6线性关系考察精密称取连翘苻对照品9．82ra9，置l00m]量瓶巾，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取5m1置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取l、3、4、5、6、7ral置10rid量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度。精密吸取上述对照品溶液20m，分别注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程。A=37755．8c一14896．2．r=0．9991。表明连翘苷在0．982—6．874pg,／ml之间呈良好的线性关系。

　　2．7稳定性试验取样品(批号040901)供试液于0、2、 6 、10、14、18小时分别进样，计算样品中连翘苷峰的平均峰面积的RSD％为1．4％。表明供试液在18小时内稳定。

　　2．8重复性试验取同一批号样品(批号040901)，分别按取样量的80％、100％、120％取样，按含量测定项下方法测定，结果平均含量为0．nm#片。ILSD％为1．8％，试验结果表明：该方法的重复性良好。

　　2．9回收率试验精密称取已知含量的同批样品(批号040901)细耢约0．59，共6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别加入0.0982mg/ml，柚的对照品溶液1ml，按上述方法测定，结果平均回收率为98．4％，RSD％为1．1％。以上试验结果表明：回收率在95．O％～105．O％，加样回收良好。

　　2．10样品测定取7批样品，按上述样品制备方法和色谱条件测定，计算其平均含量为0．11mg/片。

　　3讨论 

　　《中国药典》2005年版一部连翘项下规定，按照干品计算，连翘苷含量不少于0．15％，每片四季感冒片中含连翘药材为0．1679，考虑到含量转化率及药材的来源。以及制剂生产、贮藏等因素，应对本品中的连翘苷含量进行控制，以便更好地保证产品质量。

    　本文确定的方法阴性液无干扰，分离度好，峰型对称，测定方法的精密度好、回收率高，可以准确反应样品的实际含量，方法可行。

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