5种金花茶中总黄酮含量的测定
金花茶属山茶科山茶属植物，是常绿灌木至小乔木，1933年首次在广西发现，1965年向世界公布，是世界最珍贵的植物品种之一，据文献报道金花茶富含天然有机锗、硒、锰、钼、钒、锌等十多种对人体有重要保健价值的微量元素及氨基酸、茶皂甙、黄酮类等多种生理活性成分，具有清热解毒、利尿利湿等功效，常用于咽喉炎、痢疾、水肿、高血压、肿瘤等疾病的治疗。临床实践表明，金花茶具有抑制肿瘤，抑菌，抗衰老，增强机体免疫，增强心肌收缩力和血管弹性，增进肝脏代谢，降低胆固醇，降血压，激活人体各种酶等作用，是广西极具开发价值的特色资源优势植物。为掌握其在不同种之间分布的基本规律，本文对其主要生物活性成分黄酮类化合物进行测定，为合理开发利用金花茶植物资源提供基础资料。
1材料
1.1药品药材采自广西植物研究所植物园，经广西植物研究所植物园鉴定为：金花茶(Camesskna)、凹脉金花茶(C.imperssinervis)、毛瓣金花茶(C.pubipetata)、显脉金花茶(C.euphlebia)、平果金花茶(C.pingguoensis)。
1.2仪器紫外可见光分光光度计：北京普析通用仪器有限公司。Bailnees Series XS电子天平：瑞士Preeisa仪器有限公司。
1.3试剂 芦丁对照品：购自中国药品生物制品检定所。亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、甲醇等均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试液的制备
2.1.1对照品溶液的制备精密称取l20℃干燥至恒重的芦丁对照品22.8mg，置于1OOml容量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每lml溶液中含芦丁0.228mg)，待用。
2.1.2供试品溶液的制备精密称取金花茶药材粉末(过40目)1g，至烧瓶中，加甲醇1OOml，冷浸30分钟后，超声提取60分钟，分取滤液，药渣加甲醇1OOml，继续超声提取30分钟，过滤，滤渣用30ral甲醇洗涤，合并滤液，滤液置250ml量瓶中，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，作供试品溶液，待用。2.2含量测定
2.2.1标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、 10.0ml分别置于25ml量瓶中，各加水至10ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加4％氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂溶液为空白，在500ran波长处测定吸收度。以吸收度A为纵坐标，以对照品检测时的浓度为横坐标(m#m1)，求得回归方程：A=129.88C-0.0923(r=0.9991)，线性范围0.01824-O.0912m9／ml。
2.2.2样品含量的测定 分别精密吸取上述供试品溶液2ml于25IId量瓶中，按标准曲线的绘制项下操作，分别加入5％亚硝酸钠溶液1ml，10％硝酸铝溶液1ml，4％氢氧化钠溶液10ml及加水至刻度，经放置显色后，于500nm波长处测定吸收度，代人回归方程，计算总黄酮的含量。结果见表1。
表1 不同种金花茶总黄酮的含量测定(n=3)
种类 含量(％)
1金花茶 O.639
2凹脉金花茶 0.859 **
3毛瓣金花茶 2.702
4显脉金花茶 0.501
5平果金花茶 0.717
2.2.3精密度实验取某一浓度对照品溶液2m1，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，连续5次，RSD值为1.84％，表明仪器精密度较好。
2.2.4稳定性试验取某一供试品溶液2ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后每隔5分钟测定其吸收度，共计30分钟，其测得值基本保持不变，ILSD值为2.19％，表明供试品溶液在显色后30分钟内基本稳定。
2.2.5重现性实验取同一批药材样品按供试品溶液的制备项下方法平行制备供试品溶液5份，分别取供试品溶液。2ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，计算总黄酮平均含量为3.91％，RSD为1.13％，表明实验重；现性良好。
2.2.6加样回收率试验精密称取已知总黄酮含量的药材样品约1g共5份(编号：4)，至烧瓶中，分别准确加入芦丁对照品20.0mg，按供试品溶液的制备项下方法制备供试品溶液，按样品的测定项下方法依法显色后测定吸收度，代入回归方程中计算供试品含量。
3讨论
采用紫外分光光度法建立测定金花茶药材中总黄酮含量的方法，该方法快速、简便、准确、可靠，为今后金花茶中总黄酮含量的检测提供了便捷方法，同时为深入开发利用金花茶中黄酮类成分的研究奠定了基础。经检测毛瓣金花茶中总黄酮含量(2.702％)最高，而显脉金花茶中总黄酮含量(0.5D1％)相对较低。
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