不同激光穴位照射对膝骨关节炎C57黑鼠前列腺素E2和透明质酸的影响*

　　骨关节炎(oateoarthritis，oA)是一种危害中老年人健康的慢性进行性骨关节病。临床上以膝OA最常见。随着世界老龄化人口的增加，OA发病率呈逐年上升的趋势，其临床表现为关节疼痛、肿胀和功能障碍，其中尤其是膝关节的疼痛与功能障碍严重影响了中老年人的生活质量…。近期研究表明，前列腺素和透明质酸在骨关节炎的发病中可能起重要的作用。本实验通过不同波长激光照射C57黑鼠的犊鼻穴，观察其对膝0A模型C57黑鼠血清中前列腺素E2和透明质酸的影响。

　　1材料与方法

　　1.1  动物  选择健康C57黑鼠60只，16周龄，体重20—25g，由上海中医药大学实验动物中心提供o

　　1.2动物分组随机取黑鼠10只，不造模，为正常对照组。其余50只造模，随机分为5组，每组l0只。分别为：模型对照组、l0.6vm激光组、650nm激光组、复合激光组和假治疗组。

　　1.3造模C57黑鼠参照文献造成骨关节炎模型。

　　1.4激光治疗仪采用中国科学院上海硅酸盐研究所、上海中医药大学和上海市针灸经络研究中心联合研制的LFJ一106／650A复合激光治疗仪，其主要性能指标：cO2激光发生器，发射波长10.6／tm的红外激光(具有灸的作用)，通过卤化银光纤输出，输出功率200mw；半导体激光发生器，发射波长650nm的红色激光(具有针刺的作用)，通过石英玻璃光纤输出，输出功率36mw。两种激光可经各自的光纤分别输出，也可经光纤聚合后同时输出。

　　1.5穴位照射取黑鼠右侧犊鼻穴(膝关节外侧凹陷处)局部剪毛。10.6tan激光组：10.6mn激光照射右下肢犊鼻穴90秒；650nm激光组：650rim激光照射右下肢犊鼻穴90秒；复合激光组：10.6um与650nm激光同时照射右下肢犊鼻穴90秒；假治疗组：同样固定，激光探头也置于右下肢犊鼻穴上90秒，但不开启激光仪。各激光治疗组及假治疗组隔日治疗1次，共治疗15次。疗程均为1个月。

　　1.6取材及指标检测  治疗结束次日取材，放射免疫分析法检测黑鼠血清中前列腺素岛和透明质酸的含量，PGe试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究所提供，HA试剂盒由海军医学研究所提供。

　　1.7数据统计采用SPSSll.5统计软件对各项指标进行F检验。

　　2结果见表1。

表1    各组黑鼠血清PG蛇、HA含量的变化(*±s)  

正常组        10               11.61±6.09        695.30±136.73

模型组        10               25.30±7.05        711.20±148.40

假治疗组      10                9.98±3.83        854.89±110.98

10.6um组     10               12.23±4.32        792.374-232.68

650nm组      10                9.68±2.75        832.774-124.826

　　与正常组比较Ap<0.05；与模型组比较*P<0.05

 　　3讨论

　　 低功率激光约20年前已开始应用于()A治疗。有实验观察显示，低功率He-Ne激光照射有助于减轻关节软骨的炎症并加快受伤骨的修复。用于针灸临床的激光波长范围很广，常用的包括波长为632.8nm的氦氖激光、波长为650hm、810nt0、980nt0等波段的半导体激光，这些波段的激光具有很好的穿透力，具有针刺的效果。、但这些激光源在临床治疗中存在着一个共同问题一热效应小，无法体现灸的作用。要提高激光针灸治疗骨关节炎的疗效，有必要寻找一种能替代传统艾灸、可进行温热刺激的激光。c02激光波长为10.6tan，易被表皮吸收，产生的温升既快又高。有研究发现，低功率co2激光具有较持久的热效应。我们研制的复合激光治疗仪，将穿透人体组织能力强的650hm半导体红色激光与热效应明显的10.6pmC02激光同时照射穴位，实现了真正意义上的激光针灸。

　　E57黑鼠因其关节软骨遗传基因的特性，关节软骨会随其年龄的增长缓慢地发生进行性退变。运动负荷可加速软骨退变进程，表现为软骨细胞密度降低和软骨表面的磨耗与部分区域的软骨细胞集簇、软骨细胞肥大共存，这与单纯的增龄性模型稍有不同，与临床0A所见更为符合。临床0A是与随着年龄的增大及运动负荷的加重成正相关的。故C57黑鼠是较理想的OA模型，国外也将其作为原发性OA的动物模型。

　　前列腺素E2(Prsotagndin E2，PGE2)是巨噬细胞产生的一种非蛋白非多肽的脂肪酸代谢产物。骨关节炎中，造骨细胞可产生很高水平的PGE2，PGE2是在滑膜炎症、关节软骨丢失、软骨下骨改造更新等生理功能上发挥重要作用的炎症介质。

    　本实验中，模型组与正常组相比，血清PGR含量显著升高(P<0.05)，这与其他文献报道相符。与模型组相比，所有组别的血清PGE2均显著下降，包括假治疗组。与假治疗组相比，复合激光组的PGE2有显著升高(P<0.05)。此结果说明虽然10.6舰激光与650rim两种激光分别照射骨关节炎黑鼠的犊鼻穴90秒后，黑鼠血清中PGE2显著降低，但疗效却与假治疗组无差异，而复合激光组的疗效还不如假治疗。这种情况的出现可能出于下列两方面的原因。首先，真激光照射是一种刺激，假治疗时由于激光头也会触碰到黑鼠的犊鼻穴，这也是一种刺激，刺激作用于穴位皮肤一段时间后也可产生疗效。其次，本次造模的黑鼠是典型的运动损伤型骨关节炎，相当于中医所认为的“瘀”。而临床上多见于“寒”“湿”所致的骨关节炎。前者的治则侧重于活血化瘀，后者则侧重于温经通络。因此对于前者，具有温热效应的10.6CO2激光的疗效不如650nm激光和假治疗的穴位轻刺激。

    　透明质酸(hyaluronic acid，HA)是一种独特的线性黏多糖，广泛存在于人体和动物结缔组织。HA作为细胞外基质的重要组成部分发挥着极为重要的生理功能，其作用主要有：润滑和缓冲应力作用、调控软骨基质构建、清除功能、屏障功能及调节炎症反应。关节内HA主要由软骨细胞和滑膜8细胞分泌，是关节滑液和软骨基质的重要成分u，其在骨关节炎的病理机制中起的作用也日趋受到重视。有报道骨关节炎动物模型滑液中HA的含量较对照组有降低趋势。刘湘源等在临床上发现0A患者滑液中HA浓度明显降低，而血清HA浓度却显著升高且与临床表现及体征成正相关。以往研究者一直认为HA有助于恢复关节周围滑液的弹性，而膝关节骨关节炎患者恰恰存在关节滑液衰竭。但是这种治疗的有效性一直未得到证实。

    　本实验中，从测量所得的数值来看，模型组血清HA的含量比正常组升高，这虽然与其他文献报道的0A模型中血清HA含量相对增高相符，但增高并不显著，在统计学上无显著差异(P》0.05)。与模型组相比，仅假治疗组的血清HA浓度升高达统计学水平(P<0.05)，其余3种激光治疗组虽然均有不同程度的增高，但在统计学上无差异。之前的文献报道中，均将造模动物关节腔滑液内的HA的含量是否显著降低作为骨关节炎造模有效与否的标志，而本文选用的是测量黑鼠血清HA的含量是否增高。有可能血清中HA含量的变化不如关节腔滑液中的HA含量来得直接、敏感。另外，至今对于0A患者关节腔内的HA含量与血清HA含量之间相关性的研究甚少，在治疗过程中随着0A患者血清HA含量的升高，关节腔内的HA含量将如何变化?有待今后在进一步的实验进行研究。另外，由于黑鼠血量有限，要采集足够的血样需将其处死，这样就不能进行实验前后的数据比较，而仅作组间比较。今后的实验可选用较大的动物以便能更全面地比较和分析。

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