沙棘对小鼠免疫功能作用的研究

        沙棘(Hippophae rhamnoides L)又名醋柳、酸刺子为胡颓子科多年生灌木或小乔木沙棘的成熟果实和叶。秋、冬二季果实成熟或冻硬时采收，除去杂质，干燥或蒸后干燥。主产于陕西、四川、甘肃、宁夏、山西、辽宁等省。主要功效：益气生津，祛痰止咳，消食止泻，活血散瘀[Il。其化学成分主要有黄酮类、萜类、甾体类、蛋白质和氨基酸类、油和脂肪酸类、挥发油类、有机酸类、糖及微量元素等，是一种营养丰富、药用价值极高的植物[5l。近年来引起国内外学者的极大重视。我们主要进行了沙棘对抗体形成细胞作用的研究，旨在为沙棘的临床应用提供科学依据。

l材料与方法

1．1    仪器与药物

　　低温冷冻离心机(Beckmen，美国)；美国Multiskan产全自动酶标仪；恒温水浴箱(上海)；电泳仪(上海)；100目不锈钢网。沙棘(购于附属医院中药房)，取lOOg加水1000mL，文火煎煮2h，去渣浓缩为lOOmL(浓度为100％)备用。

1．2实验动物及分组

　　取BALB／C纯系小鼠24只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为两组，每组12只，工组为生理盐水对照组，Ⅱ组为药物实验组。

1．3方法

　　I组用生理盐水灌胃，1次／d，0．5mL／(次·只)，共灌胃10次；Ⅱ组用沙棘液灌胃，1次／d，0．5mL／(次·只)，共灌胃10次。

1．4检测项目

        (1)定量溶血分光光度测定法(QHS)。本法体外测定B细胞产生分泌抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量(以013值表示)，其结果可反映机体体液免疫功能。实验第5天分别将5％的绵羊红细胞O．2mL注入各组小鼠腹腔内。第11天颈椎脱臼处死小鼠，常规取脾脏，制备脾细胞悬液，然后脾细胞计数，调整细胞浓度至1×107／mL，将脾细胞悬液均分，每组每只小鼠设3支试管，每管依次加入脾细胞悬液，O．2％绵羊红细胞(SRBC)，1：10新鲜豚鼠血清(补体)各lmL混匀。另外分别设补体、脾细胞以及SRBC对照管各3支，置37~C水浴1h，2000转／min离心5min。取上清液用96孔细胞培养板于全自动酶标仪450nm波长处测A值，作为QHS反应值。

        (2)特异玫瑰花环形成细胞检测(SRFC)。取脾细胞O．1mL(1×107／mL)，1％SRFC O．1mL，小牛血清 O．1mL，试管内混匀，4~C放置2h，加结晶紫溶液20μL，计数500个淋巴细胞，求出SRFC／10脾细胞的形成率。

　　(3)血清IgG检测。采用对流免疫电泳实验，摘除小鼠眼球取血，分离血清，取不同稀释度血清10μL加入阴极端琼脂板孔中，将琼脂板阳极端孔内加入羊抗鼠IgG(1：32)10μL，将对流免疫电泳通电30min后观察结果，以血清最高稀释度仍有明显沉淀线为准。结果以稀释度表示。

2结果

        (1)沙棘对抗体形成细胞的影响。

        表1结果显示，用药组可促进抗体细胞形成，与对照组相比有显著性差异(P<O．05)。

        (2)沙棘对SRFC的影响。

        表2结果显示，用药组SRFC产生明显增强，与对照组相比有非常显著性差异(P<O．01)。

        (3)沙棘对小鼠IgG的影响。

        结果显示，用药组可明显促进IgG产生。与对照组相比有显著性差异(P<O．01)。

3讨论

        沙棘是临床上常用的中药，用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌打瘀肿等。现代研究表明：沙棘能显著增加小鼠血清溶菌酶的含量，极显著地提高绵羊红细胞的滴度，也能提高巨噬细胞的吞噬功能，提高淋巴细胞转化率和自然玫瑰花环形成率，且能明显增加血清IgG的含量；并有抗心肌缺氧的作用、保肝的作用和抗炎抗放射的作用。本研究重点从细胞及分子水平探讨沙棘对抗体形成细胞、 IgG分子的影响。实验证明，沙棘能增强小鼠抗体形成细胞(B细胞)活性，促进B细胞分化、增殖为浆细胞；沙棘组的QHS值增高与对照组相比有显著性差异(P<O．05)，沙棘组SRFC数目明显高于对照组，与对照组相比有非常显著性差异(P<O．01)，沙棘组的小鼠血清IgG含量增加，与对照组相比有非常显著性差异(P<O．01)。结果提示机体免疫功能下降者可口服沙棘以增强机体免疫功能，预防某些疾病。本研究为临床应用沙棘提供了实验依据。

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