高效相色谱法测定罗布麻茶中槲皮素的含量

    罗布麻茶为罗布麻Apocynum venetun L．的叶经烘干粉碎制成的单方制剂，具有平肝安神、清热利水作用。临床用于肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少，高血压病，神经衰弱，肾炎浮肿。现已被《卫生部药品标准(中药成方制剂)》收载，该标准含量测定项下规定以芦丁为对照品，采用分光光度法测定。鉴于该含量测定方法操作比较繁琐、重现性差，因此选择芦丁水解苷元槲皮素作为罗布麻茶含量测定的控制成分。本试验报道高效液相色谱法测定罗布麻茶中槲皮素含量的方法学研究，结果表明，该方法简便、准确、重现性好，可以控制罗布麻的质量。

  1仪器与试剂

岛津Lc—lOADvp高效液相色谱仪，SPD-IOAvp紫外检测器，HT一230A柱温箱；Kromasil c色谱柱(250 nln~4．6mm，5μm)；岛津uV一2401紫外分光光度计；Sartorius BP211D电子天平(准确到O·01 mg)。槲皮素对照品(批号100081—200406，购自中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。罗布麻茶样品(山东省百草药业有限公司提供)。

2方法与结果

2．1  色谱条件．以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇一0．4％磷酸溶液(50：50)为流动相；检测波长为371 nm；柱温30℃。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于4 000 c2-31。

2．2对照品溶液的制备

    精密称取槲皮素对照品6．15 mg，置于100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液(59．84 g／mL)。2·3供试品溶液的制备。．取本品内容物(过3号筛)约0．5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇一25％盐酸溶液(4：1)20 mL，加热回流l h，取出，放（4：1）稀释至刻度，摇匀，即得。(4：1)稀释至刻度，摇匀，即得。   

2．4线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液l、2、4、6、8 mL，置于lOlnL量瓶中，加流动相稀释至刻度，得对照品溶液l、2、3、4、5(浓度分别为5·98、11．97、23．94、35．90、47．84 g／mL)。每份溶液进2针，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品浓度（g/ml)为横坐标，计算回归方程。得回归方程：A=7 750．68C+1 196．33(R=O·999 7)，线性范围为5．98～47．84 g／mL。

2．5稳定性试验重复性试验中批号06040101的供试品溶液为稳定性试验考察对象，分别在o、l、2、4、6 h进行，平均峰面积RSD=0.86%,结果表明供试品在8 h内测定稳定。   

 2．6精密度试验 

  取批号为06040101的供试品溶液6份，按上述色谱条件测定峰面积，连续测定6次。平均峰面积为305797，RSD=0.85(0=6)

2．7加样回收率试验 

取批号为06040101的样品9份，每份0．25 g精密称定。置于圆底烧瓶中，分别加入对照品适量，按“供试品溶液的制备”方法配制9份供试品溶液，每份溶液进2针，采用标准对照法依法测定，计算，结果平均加样回收率为98．25％，RSD=2．64％。表明本方法回收率良好。

3讨论   

    槲皮素溶于甲醇、乙醇，微溶于水。本实验考察了不同提取溶剂和水解条件，结果表明，选择甲醇25％盐酸(4：1)溶液为提取溶剂，直接回流水解60 min，对罗布麻茶中槲皮素提取效果好。对槲皮素甲醇溶液于200～400 nm波长下扫描，结果最大吸收波长为371 nm，因此，选用371 nm作为检测波长，结果供试液中槲皮素与其它组分色谱峰得到较好的分离，灵敏度高和杂质干扰小，且空白试验无干扰，溶剂无干扰。本试验所用方法和色谱条件可作为罗布麻茶质量控制的含量测定方法。

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