HPLC法测定骨康片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

2方法与结果

2．1色谱条件色谱柱：Diamonsil c18(250 1Tim×4．6 mm，5 p,m)；流动相：甲醇．乙腈-()．03％磷酸溶液(15：25：60)；检测波长245 nm，进样量10 IxL，流速1．0 mL·min～，柱温35~C；补骨脂素峰的保留时问为2l min，异补骨脂素峰的保留为23 min。理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于4 500。

2．2供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0．1 g，精密称定，置25 mL量瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0．45 Ixm)滤过，取滤液，即得。

2．3空白辅料溶液的制备取缺补骨脂的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2．4对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的补骨脂素的1．06 mg和异补骨脂素12．29 mg，分别置50 mL容量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，作为补骨脂素对照品贮备液和异补骨脂素对照品贮备液；分别精密吸取上述对照品贮备液各5 mL，摇匀，作为混合对照品贮备液；精密吸取混合对照品贮备液5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2．5线性关系的考察  精密吸取混合对照品贮备液1．0、3．O、5．0、7．01、9．0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述溶液各10 IxL，注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积，以补骨脂素和异补骨脂素浓度C(IxL· mL)为横坐标，相应色谱峰面积积分值A为纵坐标，进行线性回归。

由上述试验结果可知：补骨脂素浓度在2．212～19．90txg·mL～，异补骨脂浓度在2．458～22．122μg·mL范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2．6精密度试验精密吸取混合对照品溶液(补骨脂素11．06μg·mL～、异补骨脂素12．29g· mL)10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积，连续测定5次，结果补骨脂素峰面积相对标准偏差RSD=1．075％、异补骨脂素峰面积相对标准偏差RSD=0．61％。

2．7稳定性试验分别于0、2、4、8、12、24 h精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积，结果表明供试品溶液至少在24 h内稳定，结果见表3。

    2．8重现性试验取本品10片，除去包衣，精蠲定，研细，取约0．1 g，精密称定，共6份，分别置 mL量瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，超声理20 rain，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0．45μm)过，取滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取供试溶液和混合对照品溶液(补骨脂素11．06μg mL～、异补骨脂素12．29μg·mL)各10μL，入液相色谱仪，测定补骨脂素和异补骨脂素的含量结果：补骨脂素平均含量为0．573 mg/片 RSD2．10样品含量测定取本品10批样品，测定样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量。

   3讨论

   3．1含量限度的确定根据10批样品含量测定结果，并参骨康胶囊质量标准中的含量限度要求，将本品的含量限度规定为：本品每片中含补骨脂以补骨脂素(c11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)的总量计，不得少于0．85 mg。

3．2本法简便、准确，重现性好，可用于骨康片的质量控制。

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