血浆中环维黄杨星D的测定方法学研
环维黄杨星D(cycL0virobuxineD)是从黄杨科植物中国小叶黄杨Buxus microphylla Sieb．et Zucc．var．sinica Rehd．et Wils．及其同属植物中提取而得到的生物碱，经研究证明环维黄杨星D及其制剂是治疖心脑血管疾病的有效药物，现收载于《中国药典》2005年版一部。
2试验材料及仪器
2．1材料
环维黄杨星D对照品(由重庆药友制药有限公司提供，HPLC法测定纯度99％)；内标物盐酸多奈哌齐(济南诚汇双达化工有限公司，含量99．82％)：水为超纯水，甲醇和叔丁基甲醚为色谱纯(美国Te． dia公司)，二氯甲烷等其他试剂均为分析纯。
2．2仪器
Lc—MS联用系统：Agilentll00 series：含四元高压泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱，Finn’i． gan LCQ Advantage MAX质谱仪配有大气压化学源(APCI)和电喷雾电离源(ESI)接口、离子阱质谱检测器；氮气吹干仪为Organomation Associates．Jnc：天平型号为METTLER TDLEDO AX205；XW
3试验方法与结果
3．1色谱条件的选择
3．1．1色谱柱及流动相的选择考察了c18和CN两种色谱柱在甲醇一水体系、甲醇一酸水体系为流动相中的色谱行为，以sB C18用甲醇．醋酸盐缓冲液(0．15％醋酸铵，0．75％冰醋酸)(80：20)为流动相峰形较好。此外，由于血样中杂质较多，需加预柱，本次试验选用AgiLent(4．
3．1．2 内标物的选择环维黄杨星D为一含氮的生物碱类化合物，并含有皂苷元母核。文红梅等曾用多奈哌齐作为内标物，本实验分别考察了结构也有胺基结构内标物：左羟丙哌嗪和盐酸多奈哌齐等。其中左羟丙哌嗪经处理后测的峰形较差，而多奈哌齐性质稳定，血浆中内源性物质不干扰多奈哌齐的出峰，且峰形较好，故选择多奈哌齐作为环维黄杨星D的内标物。内标物多奈哌齐化学结构见图
3．2质谱检测条件的选择
3．2．1离子源接口的选择大气压化学电离(AP． CI)和电喷雾离子化(ESI)都是一种“软”电离技术，本试验中使用APCI接口比ESI接口背景更干净， APCI对溶剂选择、流速和添加物的依赖性较小且对
小分子灵敏度优于ESI，所以本次选择APCI做子源接口。
3．2．2检测离子的选择检测准分子离子：环杨星D m／z：403[M+H]，见图3；盐酸多奈
m／z：380[M+H]
3．2．3质谱参数的选择质谱仪中各参数：vap zer Temp：350~C，Sheath Gas Flow Rate：自5arb，A． Sweep Gas Flow Rate：20arb，Dischange Current：
p,A，Capillarg Temp：200~C．环维黄杨星D和内标离子峰强度最强。 3．3提取溶剂的选择
对以下有机提取溶剂进行考察，
3．4环维黄杨星D血浆浓度的测定方法
3．4．1对照品溶液和内标溶液的配制 对照品溶液：取环维黄杨星D对照品5．00 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，用超纯水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为50μg·mL的对照品则备液。精密吸取上述储备液1 mL，置10 mL量瓶中，加超纯水稀释至刻度，配成5μg·mL的对照品贮备溶液，逐级稀释制成5、1μg·mL～、20cI50、20、10 ng·mL的对照品贮备液。
为了更深入地认识本品药代动力学特点，本文采用LC-APCI-MS(离子阱)联用技术，以气动辅助大气压化学电离(APCI)作为接口技术，选择环维黄杨星D的准分子离子([M十H]，in／z 403)和内标物多奈哌齐的准分子离子([M+H]，m／z 380)作为测定离子，用标准曲线法测定血浆中环维黄杨星D的浓度。血浆中内源性物质不干扰样品和内标的测定，且分离度好，最低检测限可达0．1 ng· mL，可满足药代动力学研究中血药浓度测定的要求。
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