野西瓜为白花菜科植物刺山柑copmm spinosa 的干燥果实,维医称为“开排”或“开比尔”,主要分布新疆、西藏和甘肃等地,在西亚、中亚和地中海地区均有分布。刺山柑的根、皮、叶、果均可入药,功能散气,燥湿,消肿,镇痛。主治急、慢性关节炎,坐骨神经痛,黏NrcA、黑胆质性关节疾病。近年来研究表明其含有较多的黄酮类成分。本文首次采用芦丁比色法对其所含黄酮类成分进行定情分析,以期为其深入开发利用提供依据。
1仪器、试剂、材料
1.1仪器:UV一2100型双光束紫外可见分光光度计(北京北分瑞利分析仪器有限公司)。
1.2试剂试药:芦丁对照品:上海融禾医药科技有限公司,批号:070426。NaN02、Al(№)3、NaOH、乙醇等试剂均为AR级,国药集团上海试剂有限公司产品。
1.3实验材料:21304年5月一2007年8月采集于各产地,并经第二军医大学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定:
2方法与结果
2.1对照品液的制备:精密称取芦丁对照品2.80rag,置于25ml容量瓶中,70%乙醇溶解定容,浓度为0.112mg/ml。
2.2标准曲线:精确吸了以上述对照品液1.0、2.O、3.O、4.0、5.0ml,分别置10ml容量瓶中,分别加水至5ml,各加5% NaN02溶液0.4ml,摇匀放置6min。加10%硝酸铝溶液O.4ml。摇匀放置6min。再加入4.3%NaOH溶液4ml,摇匀,并加水至刻度。放置15rain,置比色皿中,在500nm波长处测定吸光度,以吸光度(A)为纵坐标,浓度(c)为横坐标,绘制标准曲线。回归方程:A:7.
2.3样品液制备
2.3.1提取方法的考察:分别精密称取同批样品3份,各500n~,精密加入甲醇15ml,准确称重,分别以热回流(80'E,30min)、超声(功率600W,频率60kHz,30min)、振摇(每5mir振摇1次,30min)方法提取,放冷,以甲醇补足重量,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液Iml,以甲醇稀释至lOml,按2.2法-测定,结果见表1。结果表明超声方法提取完全,操作简便,故选用超声方法作为提取方法。
2.3.2提取时间的选择:取同批样品3份,每份100mg,精密称定,精密加入甲醇3ml,密封,超声处理(功率600W,频率60kHz)10、30、60nfin,取出,放冷,加甲醇补足重量,摇匀,0 45tun微孔滤膜滤过,取续滤液,按2.2法测定,结果见表2。结果表明超声30min提取完全,并且有利于节约时间,故选用的提取时间为30min。
2.4精密度试验:精密吸取同批稀释后样品液1.00ml,共6份。分别置于10ml容量瓶中,按2.2法测定,结果表明方法精密度良好。
2.5加样回收率试验:精密称取同批样品6份,100mg/份1准确加入标准品,按选定的方法制备样品,进行测定,计算回收率,结果见表4。结果表明方法加样回收率良好。2.6稳定性试验:精密吸取同批稀释原来样品液1.00ml,置lOml容量瓶中,按2.3项下方法,利用仪器提供的时间扫描功能,分别在0、15、30、45min测定吸光度,结果见表5,表明样品在45min内稳定。
2.7样品含量测定:分别精密吸取各样品液1.00ml,分别置10ml容量瓶中,按2.3项下方法测定。
3讨论
野西瓜是新疆地区作为治疗类风湿关节炎的常用民族药物。实践证明具有较好的疗效,但也具有较强的毒副作用,用药途径多为外敷。尽管国外对其化学、药理研究较多,国内研究有待深入。本文所建立的总黄酮含量测定方法,样品前处理简单,重复性好,可以作为野西瓜中总黄酮的含量测定方法。结果表明不同产地野西瓜中总黄酮含量有较大差别,这从一方面说明其内在品质存在较大差异。应加强对野西瓜化学、药理研究,完善质量标准,为临床用药安全有效提供保障。
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