马钱子及其不同炮制品水煎出物中士的宁和马钱子碱的含量测定

  马钱子为马钱科植物Stryehnos Box-vomic8 L．的干燥成熟种子。主要成分为生物碱类，其中主要是士的宁，其次是马钱子碱，为临床常用毒剧中药，具有通络止痛、散结消肿的功效。目前研究较多的主要是药典法炮制的砂烫马钱子和北方法炮制的油炸马钱子，而马钱子的江西传统炮制方法及相关改良法的研究较少，有些炮制方法如樟帮的尿泡滑石粉炒法和建帮的尿泡砂炒法甚至未见报道。本试验来用高效液相色谱法对马钱子及其各炮制品的水煎出物中士的宁和马钱子碱含量进行了测定。

1实验材料 

1．1仪器

  Agilent 1100 Series高效液相色谱仪，7725i柱温箱，Agilent 1100色谱管理系统，可变波长扫描紫外检测器(VWD)。

1．2试药

    对照品士的宁和马钱子碱均购于中国药品生物制品检定所。士的宁(批号0705-200005)供含量测定用；马钱子碱(批号0706—9403)供鉴别用，经纯化后，用归一化法测定含量为98．5％。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

  样品马钱子购自樟树药材市场，经鉴定为马钱科植物马钱 Strvchnos nux-vomica l的干燥成熟种子。

2样品炮制

2．1砂烫法

取生马钱子粉碎成细粉，按《中华人民共和国药典》2005年版(一部)马钱子项下方法炮制。

2．2油炸法

取市售麻油，倒入铁锅中加热至235℃左右(以400℃的温度计距锅底3mm处测定)，投入马钱子炸至老黄色为度(约3 min)，取出，沥尽油，晾干即得。

2．3樟帮尿泡法

原药放入童便中浸49 d(夏季放入冰箱中，温度控制在15～20℃左右)至鼓胀，取出，再用清水(长流水)漂约14～21 d，取出，刮去绒毛，再用水漂7 d，捞出，沥干水，用樟刀切成腰子片，晒干。

2．4樟帮尿泡滑石粉炒法

取尿泡马钱子片，用滑石粉炒至黄色，筛去滑石粉，研末即可。

2．5建帮尿泡砂炒法

取原药材加入童便浸泡，加盖置49 d后取出，用清水搅拌冲洗尽尿汁，再加清水漂3～5 d，取出，用碎瓷片刮去绒毛，切薄片，晒至全干。取定量的净白砂，入锅内用武火炒至洪热或轻松流利，倒入马钱片，转文火不断翻炒至表面鼓起、转棕褐色时，迅速出锅，筛去砂子，摊凉，再碾细末。

 2．6醋酸浸法

取净马钱子，用水泡2 d，润半天，洗净，切1．5mm的薄片，再用5％的醋酸溶液浸泡5 d，水漂3 d，干燥，碾碎。

2．7醋酸浸泡砂炒法

取醋酸浸马钱子片，按砂烫法项下炮制。

2．8醋酸煮法

取净马钱子用水泡2 d，润半天，洗净，切1．5 IllIn的薄片，用5％的醋酸溶液缓火煮1．5 h，取出，晾干。

2．9醋酸煮砂炒法

    取醋酸煮马钱子片，按砂烫法项下炮制。3结果

3．1  色谱条件

色谱柱：Hypersil Si02(4．6 IIlrfl×200mm，5 um)；流动相：正己烷一二氯甲烷一甲醇一浓氨水(47．5：47．5：5：0．35)；流速：1 mL／mim检测波长：254 nm。士的宁和马钱子碱的分离度值大于1．5，定量方法为外标工作曲线法。士的宁和马钱亍碱的理论塔板数分别不低于2 500和3 000。

3．2标准曲线的绘制

精密称取士的宁和马钱子碱对照品分别为11．60 mg和11．20 mg，置25 11lL容量瓶中，加氯仿至刻度，作为混合对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液3、5、7、9、11、13 uL，注入液相色谱仪，测定其峰面积积分值。以进样量为横坐标，峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。士的宁和马钱子碱的回归方程分另U为：j，=2 116．75X+9．29，，=0．999 9：Y=1 249．84X+21．35，r=O．999 8。

3．3精密度试验

分别精密吸取上述对照品溶液15 Il LI注入高效液相色谱仪，重复进样6次，计算，RSD分别为：士的宁2．01％，马钱子碱1．75％。  

 3．4重现性试验

对砂烫品煎出液测定5次，结果士的宁平均含量为O．329％， RSD=1．86％；马钱子碱平均含量为0．108％，RSD=2．68％。

3．5稳定性试验

取同一样品试液，分别于2、4、6、8、10、12 h进行测定，得士的宁和马钱子碱的RSD分别为2．14％和2．32％。

3．6回收率试验

    采用加标回收法，取已知含量的炮制品5份，精密称取，精密加入对照品贮备液适量，按样品测定项下方法操作，计算回收率。

3．7含量测定

    将马钱子生品和炮制品切成小块后粉碎成细末，过3号筛。精密称取生品及其炮制品各3份，每份约5 g，置100 ml烧杯中，加水35 mL浸1 h，煎45 min，滤出药液，药渣再删20 mL，煎20 min，过滤，合并滤液并定容至50 mL，再精密量取20 mL于分液漏斗中，加氨水调pH至9～10，用氯仿萃取4次(15、10、5、5IllL)，合并氯仿萃取液，水浴浓缩，定容至25ml按“3．1”项下色谱条件测定，每次进样15μL，求得样品煎煮液中士的宁和马钱子碱的含量。

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