新疆虫草与冬虫夏草中腺苷和虫草素的HPLC法测定比较

    冬虫夏草为麦角菌科虫草属真菌冬虫夏草菌Cordycepsshens／s(Berk．)Sacc．的子座及其寄主蝙蝠蛾科昆虫幼虫上及幼虫尸体的复合体，为我国特有珍稀名贵中药材。该药具有益精髓，补虚损，保肺，益肾，止血，化痰等功效，主要用于久咳虚喘，劳嗽咯血，阳痿遗精，腰膝酸痛等症。现代药理和临床研究结果表明冬虫夏草具有镇强心、降血脂、降低胆固醇、调节机体免疫功能、抗肿瘤等多种药理活性，对高血压、冠心病、慢性肝炎、慢性肾炎、支气管炎以及食道癌、肝癌、自身多疫性疾病等均有较好疗效。

新疆虫草为麦角科虫草属真菌新疆虫草菌C．grsacilis(Grev．)Dur et Mont的子座及其寄主蝙蝠蛾科阿尔泰蝠蛾(Hepialu alttdcohW．)昆虫幼虫及幼虫尸体的复合体[4,6j，在新疆地区也作为冬虫夏草使用。有关新疆虫草的生物学研究、形态学研究、理化性质的研究、药材性状以及寄主的生殖规律的研究均已有报道。关于新疆虫草中的腺苷和虫草素含量的研究尚未见报道，为了开发冬虫夏革新资源，我们对其进行了测定，并同时对3个不同产地冬虫夏草作了比较研究，为新疆虫草的质控提供了依据。笔者采用高效液相色谱法测定了新疆虫草与正品冬虫夏草中腺苷和虫草素的含量，考察了方法的准确性及重现性，结果稳定，重现性好，报道如下。

1仪器与材料

    日本岛津LC一10A液相色谱系统；LC一10ADw泵， CTO一10Asvp柱温箱，SIL—HTc自动进样器，SPD— MlOAvp二极管阵列紫外可见检测器。

    腺苷对照品(批号110879—200202)和虫草素对照品(批号858—200202)购于中国药品生物制品检定所。

    甲醇为色谱纯；重蒸水。

    冬虫夏草(西藏那曲)，冬虫夏草(青海玉树)，冬虫夏草(四川小金)均购自安国药材市场，经北京大学药学院王弘副教授鉴定为冬虫夏草Cordyceps sineHsis(Berk．)Sacc。

新疆虫草采自新疆阿勒泰地区布尔津林场，经北京大学药学院王弘副教授鉴定为麦角菌科细虫草(Cordycem grsacilis(Grev．)Dur et Mont。2方法与结果2．1色谱条件适用性研究：选用Dikma тМ C１８8色谱柱(4．6mm×250mm，5tan)；流动相：甲醇一水(15：85)，用O．45wn滤膜过滤；柱温为30％，流速：1．O mL／min；检测波长：260nm。在该色谱条件下，腺苷和虫草素峰与相邻色谱峰均基线分离，理论板数按腺苷计算大于5000，按虫草素计算大于6000。见图1．2．3。

       

 2．2对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的腺苷对照品2．5mg，虫草素1．0mg，置50ml容量瓶中，加90％甲醇溶解并定容，即得混合对照品溶液。

2．3标准曲线的制备：分别精密吸取混合对照品溶液2．0，6．O，10．0，14．O，18．ota，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定峰面积，以峰面积为横坐标，进样量为纵坐标求回归方程，其中腺苷的回归方程为：Y=3．3414×10６一5．6927×10３，r=0．9998，线性范围0．1012～O．9614gg。虫草素的回归方程为：Y=2．9318×106x一1．9702×1a4。r=O．9997．线性范围0．0448—0．4256ttg。2．4供试品溶液的制备：取干燥至恒重的供试品，研成细粉，取O．50g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加90％甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足失的重量，摇匀，O．45tan微孔滤膜滤过，取续滤液，即为供试品溶液。

2．5精密度试验：精密吸取供试品溶液iota，按上述色谱条件下连续测定5次，得腺苷和虫草素的峰面积，分别计算标准偏差，其中腺苷的RSD为0．82％，虫草素的RSD为O．95％(n=5)，表明精密度良好。

2．6稳定性试验：按2．4项下制备供试品溶液，精密吸取 iota，按上述色谱条件分别于O，1，2，4，8h测定腺苷和虫草素的峰面积，计算标准偏差，其中腺苷的RSD为1．01％，虫草素的RSD为1．14％，表明供试品溶液在8h内稳定。

2．7重复性试验：取新疆虫草供试品细粉O．50g。精密称定，置锥形瓶中，共称取5份，按2．4项下制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液各10td，按上述色谱条件测定腺苷和虫草素的峰面积。结果腺苷的平均含量237．7ttg／g，RSD为1．54％；虫草素的平均含量为38．9gg／g，RSD为1．87％。证明此方法重复性良好。

2．8加样回收率试验：取新疆供试品细粉0．25g精密称定，置锥形瓶中，共称取5份分别加入混合对照品溶液(含腺苷60．2pg／ml，虫草素9．97tw,／m1)1ml，混合均匀，置水浴上用氮气吹干，精密加90％甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足减失的重量，摇匀，O。45tnn微孔滤膜滤过，取续滤液，即为加样溶液。另称取新疆虫草供试品0．50g，按2．4项下制备成空白溶液。精密吸取加样溶液和空白溶液各10gl，注入液相色谱仪中，测定腺苷和虫草素峰面积，计算加样回收率。结果腺苷加样回收率在91．1～100．8之间，平均加样回收率为99．4％；虫草素加样回收率在96．3％。101．1％之间，平均加样回收率为98．8％，说明加样回收率良好。2．9样品的测定：对收集到的4份样品进行了含量测定。结果见表1

3讨论

    新疆虫草(c．grsac／／／s(Grev．)dur et Mont)为新疆阿勒泰山和伊犁地区特有的虫草资源，具有与冬虫夏草相同的临床作用，被收入新疆维吾尔自治区药品标准。由于新疆虫草的寄主阿尔泰蝠蛾(Hepialu dtai~la形．)为蝙蝠蛾科昆虫，符合冬虫夏草菌的寄主要求，而且新疆虫草菌(C． grsac／／／s)也与冬虫夏草菌(c．s／nens／s)为同属真菌，因此从亲缘关系上讲新疆虫草是目前我国各种虫草和蛹草中最接近冬虫夏草的药材，有可能成为冬虫夏草新资源。

    腺苷和虫草素是冬虫夏草中主要有效成分之一，具有广泛的生理活性。腺苷和虫草素可用于提高免疫功能，干扰RNA和DNA的合成，抑制不正常细胞(如癌细胞)的分裂。临床上可用于治疗癌症、白血病、慢性气管炎、肺心病，降血脂血糖和抗衰老等。由于腺苷具有显著的生理活性，因此《中国药典》2005年版一部“冬虫夏草”项下收载了腺苷的含量测定方法，作为评价冬虫夏草的质量优劣的标准。

    通过对3种不同产地的冬虫夏草和新疆虫草中腺苷和虫草素的含量测定，结果表明：冬虫夏草和新疆虫草中均含有腺苷和虫草素两种成分，其中新疆虫草中腺苷含量为237．7pg／g，介于3个冬虫夏草样品(145．2-307．4pg／g)之间；新疆虫草中虫草素含量高达38．9gg／g，为冬虫夏草含量(4．2～11．3tees)的3～10倍左右。说明新疆虫草中这两种核苷类有效成分接近和高于冬虫夏草，为新疆虫草作为冬虫夏草的代用品提供了科学依据。

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