HPLC法测定乳癖消帖膏中丹皮酚的含量

    乳癖消帖膏是由木香、牡丹皮、赤芍、夏枯草、三七等15味中药组成的膏药制剂。具有软坚散结、清热解毒、活血止痛之功能。用于乳癖气滞血瘀症，症见乳房结块、胀痛、压痛、乳腺囊性增生病见上述证候者。本试验对乳癖消中牡丹皮所含的有效成分丹皮酚进行含量测定方法学考察，得到较满意的准确度和精密度试验结果，说明本试验方法是可行的，可作为乳癖消帖膏的质量控制方法。

  1仪器和试剂

  1．1仪器：岛津Lc一10A型高效液相色谱仪(日本)，SPD—vP紫外检测器，CLASS—VP色谱工作站，TP一300超声波清洗机，色谱柱~8h．im—pack VP—ODS C18柱(150×4．6m，粒度5ttm)。样品由内蒙古通辽市科尔沁药业提供。

  1．2试剂与试药：甲醇(色谱纯，天津天大化学试剂厂)；水为重蒸馏水。其它试剂均为分析纯。

  1．3对照品：丹皮酚(由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，编号：0708—9704)；样品：由内蒙古通辽市科尔沁药业提供。生产批号为20051118；20050315；20050708。

  2色谱条件

流动相：甲醇一水(48：52)；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1．0ml／min；柱温30~C；检测波长为274nm；进样量：10μL。

3实验方法与结果

3．1对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品17．16mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每lml含丹皮酚171．6μg)。

3．2供试品溶液的制备：取本品4片，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 lOml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(O．45tan)滤过，即得。3．3线性关系的考察：分别精密量取对照品溶液O．25、1、2,3、5、lOml，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10m注入液相色谱仪，记录谱图及峰面积值，以进样量(w：μg)为纵坐标，以峰面积值(A)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为w=1．88287e一005X+0．392254(r=O．9998)，结果表明丹皮酚在进样量为1．716～68．64tag范围内呈良好的线性关系。

3．4  精密度试验：精密量取丹皮酚对照品溶液(0．020592mgna)10μg，连续进样5次，测定丹皮酚峰面积值，结果峰面积平均值1087441，RSD为O．87％。

3．5稳定性试验：取同一供试品溶液，每隔一定时间，O、2、4、’6、8小时、精密量取lOt．d注入色谱仪，记录峰面积值，结果平均峰面积1253697，RSD为1．2％，表明供试品溶液在8小时内稳定性良好。

3．6重现性实验：取同一批号样品5份，每份4片，按照供试品溶液制备项下方法操作并注入液相色谱仪，测定每份含量，结果RSD为0．57％，表明本试验重现性良好，结果见表1。

3．7  加样回收率试验：取已知含量(0．741mg／片)的样品(批号：20050303)／5份，每份2片，分别精密加入对照品溶液(O．1716mg／m1)10ml，按供试品溶液制备项下方法操作并测定每份含量，计算回收率，结果平均回收率为96．26％， RSD为1．39％，结果见表2。

3．8样品分析：按上述色谱条件，取3批样品(批号分别为20051118；20050315；20050708)，照供试品溶液的制备方法，各进样10μL，每批试样平行检洳3次，以外标法计算含量。该条件下丹皮酚的保留时间为10．9min。供试品含量测定。结果见表3。

         

4讨论

4．1系统适用性试验：理论塔板数：N>4000；拖尾因子：T=1．04。检测过程中系统稳定。

4．2样品测定试验RSD<3．3。乳癖消帖膏中丹皮酚的含量太低，影响检测的灵敏度，使得RSD值偏高。

4．3分析其原因，考虑本品是膏药剂，投料是牡丹皮药材的75％乙醇提取物，并与其特殊复杂的辅料组成以及特殊生产工艺有关，比如涂膏时需加热至80～85℃停留一定时对照品(缺牡丹皮)，操作同样品分析项下方法，测得为：阴性对照品色谱图中在与丹皮酚对照品色谱相对保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对乳癖消帖丹皮酚的测定无干扰，对照品、样品和阴性样品色谱峰 l、2、3间，随着溶媒汽油的挥发，丹皮酚等挥发性成分必有损

4．4本法简便、灵敏、准确、专属性强，故认为可作控癖消帖膏的检测方法。

 

 

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