l注射用银黄冻干粉针分166.5、82.25、41.12 mg/kg 3个剂量组连续给大鼠注射35 d,停药15 d,结果各受试动物一般状况良好,外观、行为、排泄物等方面均未见异常变化。血常规检查结果表明,注射用银黄冻干粉针连续给药35 d,雄性小剂量中性白细胞、恢复期中性白细胞及雌性中剂量血红蛋白、红细胞与对照组比较有差异,但在本实验室正常范围内波动,其它各项指标与对照组比较均未见差异。血液生化指标检查结果表明,注射用银黄冻干粉针连续给药35 d,雄性大鼠大剂量。
T—BIL、中剂量cr及雌性大鼠中、大剂量ALT和中剂量Cr、大剂量TP与对照组比较有差异,恢复期雄性大鼠小剂量ALP、 cr,中剂量T—BIL、ALB,大剂量ALT及雌性大鼠小、中剂量AIJP和中剂量ALB、TcH0、大剂量T—BIL与对照组比较有差异,但在本实验室正常范围内波动,其它各项指标与对照组比较未见差异。病理检查表明,主要脏器的组织形态学正常,未见与药物毒性相关的明显病变。提示本品注射给药对大鼠无长期毒性作用,说明按拟定的临床给药途径、剂量和疗程用药是安全的。
决明子是临床上常用的中药,有清肝明目、润肠通便和调节血脂等多种生物学功效。决明子富硒不仅提供了一种新的含硒补品,而且很可能提高决明子的药用范围和疗效,因此,准确测定富硒决明子中硒含量具有重要意义。目前,测定硒的方法报道较多,原子吸收分光光度法具有灵敏度高、需要样品量少、分析速度快、稳定性好等优点而被广泛用于微量元素的测定。
1 实验材料1.1试药
高氯酸、硝酸、硝酸镍(国产优级纯);土温80(进口分析纯);硒标准溶液(GSB 04-1751-2004,北京有色金属研究总院);超纯水。富硒决明子芽由本实验室自制。1.2仪器及工作条件
日立z一2000原子吸收分光光度计(日本日立公司);恒温可调电热板;电热恒温水浴锅;通风橱;超纯水系统(美国 Milipour公司)。检测波长:196.00 nm;狭缝宽度:1.3 nm;硒灯电流:12.5 mA;背景矫正:塞曼;进样体积:20μL。温度控制:干燥,80~
用电子天平准确称取0.
在已确定的最佳检测条件下,将硒标准溶液系列稀释(O、2.0、4.0、6.0、8.O、10.0、20.O、40.0、60.O、i00.0μg/L),测定对应的吸光度值,绘制标准曲线。标准曲线方程:ABS=5.996 134×
准确称取样品,采用标准加入法,向其中加入10 μg/L硒标准溶液,按样品测定方法,重复测定4次,回收率在90%~110%之间,符合测定要求。2.4方法的精密度和重现性
将消化好的样品溶液重复测定12次,其相对标准偏差均值为3.607%,表明该方法的精密度较高,重现性较好。
从表l、表2的数据可看出,本实验采用的消化条件和测定条件能够满足实验要求,精密度、准确度和重现性也较好,而且随着培养液中亚硒酸钠浓度升高,决明子芽中硒含量增加。但也有例外,如3号(培养液亚硒酸钠浓度为150 mg/L)和6号(培养液亚硒酸钠浓度为300 mg/L);另外,随着培养液中亚硒酸钠浓度升高,决明子芽生长减弱,因此,在本实验条件下,培育富硒决明子芽的适宜亚硒酸钠浓度为250 mg/L。
4讨论
4.1检测限和敏感率
波长196.00 nm,敏感率为1.0;波长196.3 nm,敏感率0.15。故本实验选择的检测波长为196.00 nm;检出限是信噪比和信背比的函数,所以,检出限与背景信号浓度存在一定关系。本实验重复测定空白溶液10次,RSD均小于1%,表明仪器对空白溶液硒含量检出限是0.1 pg/L。
4.2样品处理方法
在实验过程中,采用2种稀释和定容样品的方法。一种样品经混合酸消化后,直接用1%的硝酸稀释定容,测定结果偏低,误差达36.57%。主要原因是样品在灰化阶段大量挥发,而导致结果偏低。另一种是在样品定容液中加入基体改进棚酸镍和土温80后,灰化阶段挥发损失的硒大为减少,从而使测定的准确性提高。
4.3测定数据
测定结果:富硒决明子芽中硒含量见表2。样品1~8为笔者制备的8种不同含硒量的决明子芽。富硒决明子芽在制过程中,培养液中亚硒酸钠的浓度分别为50、100、150、200250、300、350、400 mg/L,培养时间为72 h。
5结语
笔者筛选了培育富硒决明子的适宜亚硒酸钠浓度和培时间,优化了石墨炉原子吸收分光光度法测定决明子中硒含量的介质,提高了测定的准确度,优化了原子分光光度法的测定条件。以标准硒溶液的系列稀释液建立的标准曲线为基准,测定了富硒决明子芽的含硒量,测定结果基本可靠。
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