HPLC法测定得莲化滞片中黄芩苷的含量

    香莲化滞片是由黄芩、当归、白芍、木香、陈皮、槟榔等十二味中药组成的中药复方制剂，具有调中化滞，止痛止痢功效。用于红白痢疾，里急后重，脘腹绞痛，停滞不消等症。现行国家药品标准中对该制剂无有效的质量控制项目，本试验根据处方中黄芩的主要有效成分黄芩苷的理化性质，建立了高效液相色谱法测定香莲化滞片中黄芩苷的含量。结果表明，此法操作简便，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

1仪器与试药

1·1  仪器  Agilent 1100高效液相色谱仪：包括G1315A／B DAD检测器，G1313A ALS自动进样器，Agilent 1100色谱工作站(美国安捷伦科技有5司)；梅特勒电子天平AE240(瑞士)；SZ-97自i重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；超声波i器(上海科导超声仪器公司)。

1．2试药甲醇(色谱纯)、水(重蒸馏水)、黄对照品(中国药品生物制品检定所，批号：74l 200308)；香莲化滞片(大理白族自治州中药制药份有限公司生产)。   

 2方法与结果   

2．1色谱条件Agilent ZORBAX sB c(4．6nr150 mm，5 Ixm)色谱柱；流动相：甲醇．水(含0．1%酸)在0～15 min内由20：80至45：55的比例行梯度洗脱；在15～25min内由45：55至60：的比例进行梯度洗脱。流速：1．0 mL．min～；柱30℃；黄芩苷检测波长为280nm E。引。在该色谱爿下黄芩苷被洗脱、且达到基线分离，保留时间20．449 rain。按黄芩苷峰计算理论塔板数不低于122.2对照品储备液的制备精密称取照品黄芩苷15．2 mg置5 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为储备液。

2.3供试品溶液的制备取供试品10片，精密称定，求出平均片重，研细，过5号筛，精密称取约0．5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，精密称定，超声处理30 min，放冷，再称定重量，并用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液10 I．zL进样。

2．4阴性样品溶液的制备按处方制备不含黄芩的片剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2．5线性关系的考察精密吸取黄芩苷对照品贮备液，用甲醇配制成质量浓度为0．030 4，0．152 0，0．304 0，1．520 0，3．040 0 g·L的对照品系列溶液。取上述5种溶液各10ul分别进样，记录峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标i--"曲线，并进行线性回归分析，黄芩苷的回归方程和线性范围分别为：y=258 0．8 x+39．92，r=0999 8；线性范围为0．304—30．4ug。2．6精密度试验取同一对照品(黄芩苷o．304 gI}．L)溶液，连续进样6次，分别测定峰面积，计算RSD值为o．15％，表明进样精密度良好。

2.7重复性实验按上述供试品制备方法及色谱条件操作，取同一批样品(批号070417)，制备5份供试品溶液，依次进样测定黄芩苷的含量，结果黄芩苷含量平均值为6850．27ug，RSD为1．78％，结果表明本实验重复性良好。

2．8稳定性试验取同一供试品溶液隔0，2，4，6，8 h进样10ul，按上述色谱条件测定黄芩苷的峰面积，RSD为1．54％。结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2．9加样回收率试验精密称取已知含量的样品(批号070417)粉末约O．25 g，精密加入黄芩苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果表明，本试验确立的提取方法与处理方法收率试验可靠。

2．10样品含量测定采用上述供试品溶液制备方法及色谱条件，对3批样品中的黄芩苷含量进行测定.  

3讨论

3．1本试验测量波长，对黄芩苷对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描，结果黄芩苷在280 nm处有最大吸收，帮选择280mm作为测量波长。

3.2本品组方较复杂，相互干扰因素多，经多次试验，采用本文所报道的色谱条件其分离效果好，理论塔板数高，重现性发，能有效控制本品质量。

3.3本试验曾采用乙腈水（0.1%磷酸）作流动相进行梯度洗脱，结果表明，分离较差。用甲醇-水（0.1%磷酸）进行梯度洗脱，分离度和峰形均较好。

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