太白乌头提取物抗氧化活性研究
自由基是指能独立存在的，含有1个或1上的不配对电子的任何原子或原子团。自由基生物体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等作用，导致机体的损伤。据报道自由基所引起的疾病已超过100余种，主要有心肌梗塞、癌症等，更重要的是其氧化产物和中间产物会损伤生物膜、酶、蛋白质及细胞的功能，其中一些是公认的致癌物。
太白乌头Aconitum taipeicum Hand．．Mzt．，又名金牛七，系毛茛科Ranunculaceae植物太白乌头的干燥母根和子根。其药理作用包括驱风活血、解痉止痛、麻醉败毒、免疫调节、心血管作用和抗肿瘤作用。本试验采用DPPH法和邻苯三酚自氧化法对太白乌头用不同极『生溶剂提取部分进行抗氧化活性的测定，了解其抗氧化活性成分在各相的分布，为以后进一步研究其活性化合物奠定基础。
1材料与方法
材料
1．1_1原料太白乌头Aconitum taipeicum Hand．一 Mzt．采于陕西太白山，经西安交通大学医学院天然药物化学教研室郭增军副教授鉴定。
1．1．2试剂及仪器DPPH·(二苯代苦味肼自由基)：Sigma公司生产；邻苯三酚：天津博迪化工有限公司；三(羟甲基)氨基甲烷：天津福晨化学试剂厂；抗坏血酸：上海山浦化工有限公司；乙二胺四乙酸：天津百世化工有限公司。752紫外光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂。
1．2试验方法
1．2．1样品的制备取干燥的太白乌头根
1．2．2试液的配制样品溶液配制：DPPH·法时，取极性不同的5部分用甲醇配成适当浓度。邻苯三酚自氧化法时，水溶部分用双蒸水配制，其他部分用甲醇配制。
0．1 mmol·L DPPH·溶液：取4 mg DPPH·加甲醇定容至100 mL(避光储存，1 d内有效)。1．5 mmol·L抗坏血酸溶液：取13．2 mg抗坏血酸加水定容至50mL(冰箱储存，2 d有效)。pH值8．2的0．05 mol·LTris-HCl溶液：取0．605
0．Ol mol·L邻苯三酚溶液：0．126
在0至6号比色皿中分别加入0、5、10、20、40、
70、100uL样品溶液，然后加甲醇至3mL。在0至6号比色皿中加入0、5、10、20、40、70、100uL样品溶液，然后加DPPH·溶液至3 mL。混匀。避光室温反应30 min，在517 nm处以i(0～6)号比色皿调零，测i号比色皿的吸光度Ai，每一吸光度平行测三次取其平均值。计算每个比色皿中的样品浓度(公式1)和相对吸光度(公式2)，以比色皿中的样品浓度为横坐标相对吸光度为纵坐标作图。并求出相对吸光度为O．5时样品浓度IC50和AIHE(公式3)。1．2．4邻苯三酚自氧化法测抗氧化活性该法是利用在碱性条件下，邻苯三酚发生自氧化，生成有色物质红碚酚，同时生成·0：_【引。SOD或具类SOD活性的物质在有质子存在的介质中能迅速将·0：一歧化产生0：和HzO，从而阻止中间产物的积累，据此可测定抗氧化活性。
在比色皿1～4中分别加入2．8 mL pH值为8．2的0．05 mol·L-1(含2 mmol·L EDTA溶液)的Tris-HCl溶液，然后在1皿中加再0．1 mL样品溶剂和O．1 mL 0．01 mol·L的HCl，在2中加0．1 mL样品溶剂和0。1 mL0．01 mol·L的邻苯三酚溶液，迅速摇匀比色皿，3 min后，以1调零测2的吸光度An。在3中加0．1 mL样品溶液和0．1 mL 0．01tool·L的盐酸溶液，在4皿中加入O．1mL样品溶液和O．1 mL O．01mol·L的邻苯三酚溶液，迅速摇匀比色皿，3 min后，以3皿溶液调零测4皿溶液的吸光度为纵坐标作图，求出相对吸光度为纵坐标作图，求出相对吸光度为0．5时样品浓度IC50和和AIHE。
2结果与讨论
2．1抗坏血酸对DPPH·和·02一的清除作用抗坏血酸是一种常用的抗氧化剂，其抗氧化性源自其结构中的烯二醇基团极易脱氢而被氧化为二酮结构。
抗坏血酸清除DPPH·的IC50=2．013±0．107ugm L～，抗坏血酸清除·O：一的IC50=45．37±2．361zg·m L～。
2．2不同极性萃取部分对DPPH·的清除作用不同极性萃取部分清除DPPH·的IC50值结果DPPH。是少数人工合成的稳定的自由基之一，其稳定性主要来自共振稳定作用以及3个苯环的空间障碍，使夹在中间氮原子上的不成对电子不能发挥其应有的电子成对作用，其对自由基清除剂具有广谱性筛选效果。由表l可以看出，太白乌头的乙酸乙酯部分有最强的清除DPPH·能力，其后依次为正丁醇部分、石油醚部分；氯仿和水溶部分相当且清除DPPH。的能力都较差，这可能与乙酸乙酯部分含有较多的酚类化合物及正丁醇部分含有还原性杂原子的生物碱有关。这些成分单独存在具有抗氧化作用外，它们组合在一起甚至产生协同作用使抗氧化性大大增加。如生物碱和酚类，生物碱的氮原子被酚的氢质子化后，与氮原子结合的化学键变松弛而易断裂，容易被氧化，而酚失去氢后苯环上电子云密度降低导致酚更易氧化为醌。但本研究太白乌头萃取5部分成分清除DPPH·的能力均弱于抗坏血酸，这种状况可能随着分离纯化的进一步进行以及单体化合物的分出将得到改善。
z．3不同极性萃取部分对·0：一的清除作用不同极性萃取部分清除·0：在生物体系中，电子转移是一基本变化，氧分以通过电子转移变成其他种类的活性氧，其间互关系如下：02一·0：一一H，0，一．OH—HJ管·OH是最活泼的活性氧物种，其反应特点专一性，几乎能与所有的体内物质反应。但倘除了·0：一，则·OH的生成则成了无水之源从根本上预防体内活性氧自由基的生成，从而抗肿瘤的目的。由表2可以看出仅有石油醚部乙酸乙酯部分有清除·O：一的能力，但均弱=于血酸，这种情况可能随着分离纯化的进一步进及单体化合物的分出得到改善。
本文研究表明：太白乌头醇提物乙酸乙酯正丁醇部分和石油醚有较好的抗氧化活性，尤乙酸乙酯部分，有进一步分离纯化的价值。单合物的抗氧化性以及抗氧化性与抗肿瘤活性的性有待进一步研究。
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