高效液相色谱法测定复方益母胶囊中阿魏酸的含量

    张国民，齐赤虹，杨工昶，李志军。    

 (1开封市食品药品检验所，河南开封475002；2．河南省医药学河南开封475001；  

    3·河南大学药学院，河南开封475004）   

    摘要：目的建立高效液相色谱法测定复方益母胶囊中阿魏酸含量的方法。方法采用ZORBAXSB—c，色谱柱，流动相为乙腈一0·2％磷酸水溶液(12：88)，检测波长为316 nm，流速为1．0 mL／min。结果  阿魏酸在0．8～13ug／ml范围内呈良好的线性关系(r=0．999 99，n=6)，平均回收率为1 03．0％(RsD=o．4％，n=5)。结论本法简单可行：准确度高，重现性好，回收率高，能有效控制复方

关键词：复方益母胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法

中图分类号：R284．1    文献标识码：A  文章编号：1005-5304(2008)02-0048-03 content Determination 0f FerulicAcidin compound Prescribe Motherwort Herb capusle by HPLCl zHANG Guo,minI，QI Chi-hongz，YANG Gong-chang2，et a1 rJ．Kaifeng Institute， for Food and Drug Control Kaifengl 475002，China：2．Medical College D，Henan Province，Kaifeng 475001，China)   

    Abstract：objecfive To estblish a HPLC method for content determination of ferulic acid in compound prescribe Motherwort Herb capusle．Method The column ZORBAXSB-C18 was used with Acetonitrite-0．2％iphosphoric acid aqueous solution(12：88)as mobile phase，and detective wavelength was 274 nm，thel flow rate was 1．0 mL／min·Result Within the range 0f 0．8～13 Pg，fel"ulic acid presented a fine linearrelationship(r=0．999 99，n=6)．The average recovery was 103．0％(RSD=o．4％，n=5)．  Conclusion the method iS suitable，accuracy is high and reproduciblity is good，recovery is high，and Can control the qual．．ity of com—pound prescribe Motherwort Herb capsule.

rulic acl…一PLCKey words：compound prescribe Motherwort Herb caDsuie ferulic cid HPLC.

    复方益母胶囊是原益母冲剂(ws3一B～1812—94)的改进剂型，由益母草、当归、川芎、木香4味药组成，具有活血调经、行气止痛的功效，用于气滞血瘀、月经不调、痛经、产后瘀血腹痛的治疗。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》，其中无含量测定方法。本品处方中含有当归与川芎，均含有阿魏酸，结合本品的功能主治及制法，故笔者确定以阿魏酸为检测指标，采用高效液相色谱法测定成品中阿魏酸的总含量。

1仪器与试药

    Agilent 1100高效液相色谱仪(在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器)；MILLIPORE Simplicity超纯水器；超声波清洗器(型号cX一250，功率250 w，频率33 kHz，北京医疗设备二厂)；电子天平[Metler-AE240型梅特勒一托利多(上海)有限公司]。

    乙腈(色谱纯，批号031 123，Fisher)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。阿魏酸对照品(购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号773—9910)；复方益母草胶囊由开封市民康制药厂提供(批号040201，040202，040203，040204，040205．040206，040207，040208，040209，040210)。

2色谱条件

    色谱柱：ZORBAXSB—c-s(5 pm，4．6 mm~250 mm)；流动相：乙腈一O．2％磷酸水溶液(12：88)；检测波长：316 nm；流速：1．O mL min。刻度，制成阿魏酸对照品贮备液。

3．2提取方法的选择

取本品内容物(批号040201)约1．6 g．2份．精密称定，密加入甲醇30 11lL，称定重量，分别回流提取、超声处理胡_后，补足失重，滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别吸取2种供试品溶液各20 uL，注入液相色谱仪，按E述色谱奎法测定。结果表明，超声处理率最好，且该法操作简单．故采用超声方法提取。  

 3．3溶剂种类的选择   

    取本品内容物(批号040201)约1．6 g，3份．精密称定，别精密加入50％甲醇、70％甲醇、甲醇各30 mI。密塞．称定超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量。分别用相应溶剂取上述供试品溶液各20 uL，注入液相色．谱仪．按上述色谱条件一依法测定。结果表明，以  甲醇为溶剂。阿魏酸的提取效率好，故确定提取溶剂为70％甲醇。   

    取本品内容物(批号    )约1．6  份．精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入  甲醇30ⅡlL，密塞．称定3．8线性系考察加入70%甲醇30ml，密塞，称定重量，群宇。供试品溶液的制备摇匀，滤过，取续滤液，即得。

h 7空白试验

3.6供试品溶液的制备取本品内容物1．6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇30 IfIL，密塞，称定重量，超声(功率250 w，频率33 kHz)处理45 min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

317空白试验

  取益母草加水煎煮2次，第1次2 h，第2次1 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成清膏；除当归、川芎外其余一味木香，用50％乙醇回流提取2 h，滤过，滤液回收乙醇后与上述清膏合并，浓缩成稠膏状，加蔗糖及乙醇适量，制成颗粒，整粒，装胶囊，即得空白对照品，并按供试品溶液制备方法制得空白溶液。精密量取阿魏酸贮备液1 IIlL，置50IIlL量瓶中，用10％乙醇稀释到刻度，制成对照品溶液。分别精密吸取上述2种溶液10¨L，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果见图1。试验结果表明，空白无干扰。

 线性关系考察

 精密称取阿魏酸对照品2．04 mg，置i00 mL量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制成阿魏酸对照品贮备液。再精密量取贮备液适量，制成不同浓度的对照品溶液。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20 uL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积积分值为横坐标、阿魏酸进样浓度(mg／mL)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：j，(mg／mL)=0．000 001 418 12+O．000 008 005 09Z(，=0．999 99，月=6)。结果表明，阿魏酸在0．8～13“g／fIlL范围内呈良好的线性关系。

3．9精密度试验

    精密吸取上述对照品溶液(0．000 408 mg／mL)各20¨L，连续进样5次，记录峰面积，计算，RSD=O．27％。试验结果表明，仪器精密度良好。

3．1 O稳定性试验

    称取本品内容物1I 632 g，置三角瓶中，加70％甲醇30 IIIL，超声处理45 min，放冷，补重，滤过，分别于0、2、4、6、8 h精密吸取续滤液20 uL，注入液相色谱仪，依法测定，记录峰面积，计算峰面积的相对标准偏差。结果表明，供试品溶液在8 h内稳定。

3．11重复性试验

    按“3．6”项下供试品溶液的制备方法，分别称取同一批号、样品约1．6 g，6份，依法操作，测定阿魏酸含量，计算相对标准偏差，结果平均含量为0．062 mg／g，RSD=1．12％，表明重复性良好。

3．12样品测定

    取10批中试样品，按“供试品溶液的制备”项下方法及色谱条件测定，结果见表1。

  表1样品含量测定结果

    称样量  阿魏酸含量阿魏酸含量  平均值  RSD

  批号    (g)(rag／g)  (mg／粒)  (mg／粒)  (％)

  040201    1．745 2    0．062    0．021 7

  040202    1．601 7    O．067    O．023 5

    1_601 7    O．064    0．022 4

  040203    1．686 0    0．065    O．022 8

    1．686 O    0．064    0．022 4

  040204    1．621 0    O．068    O．023 8

    1．621 0    0．067    O．023 5

  040205    1．6021    O．068    0．023 8

    1_6021    O．066    O．0231  O．022 9  2．51

  040206    1．600 5    0．064    0．022 4

    1．600 5    0．064    O．022 4

  040207    1．570 O    0．065    O．022 8

    1．570 O    O．066    O．023 1

  040208    1．603 4    O．066    0．0231

    1．603 4    O．066    O．0231

  040209    1．621 O    O．065    O．022 8

    1．621 O    O．0．68    O．023 8

  040210    1．602l    O．066    O．023l    ‘

    1．6021    O．064    0．022 4

    根据以上10批含量测定结果，暂定本品每粒含当归和川芎总量以阿魏酸(C。棚。。0。)计，不少于18．3¨g。

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