丹参妇康颗粒依据中医药理论,采用现代制剂技术制成的含有当归、丹参、赤芍、红花等5味药材的中药复方制剂,该方剂在治疗月经不调、痛经、闭经、产后淤血腹痛不孕等方面疗效显著。赤芍是本方主药,其主要成分为芍药苷,具有镇静、解痉、抗炎、抗凝血、抗血栓等多方面的作用。本实验采用反相高效液相色谱法(RP—HPLC)对该胶囊剂中的芍药苷测定方法进行了研究,结果表明,该方法简便可行,结果准确,其他成分无干扰。适用于该制剂的含量测定,能够有效控制丹参妇康胶囊的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器HPll00 HPLC,HPRev.A.05.01[273]色谱工作站,
1.2 试药丹参妇康胶囊(040307),芍药苷对照品(0736—200117中国药品生物制品检定所),所用其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱:Reliasil c18(5 txm,
2.2 供试品溶液的制备取中药颗粒约
2.3 阴性对照液的测定取不含赤芍处方同法制备的阴性样品,按样品测定项下方法制备阴性溶液。
2.4芍药苷标准曲线的制备取干燥至恒重的芍药苷对照品约12 mg,精密称定,置100 ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得对照品储备液。精密吸取芍药苷对照品储备液0.04,0.12,0.36,1.2,2.4 ml,分别置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。分别吸取10μl,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定峰面积,将进样浓度(X)与峰面积(y)进行回归处理,回归方程为: y=116 848.53X+592.90,r=0.999 5。实验表明,芍药苷对照品在0.496~29.76μg·ml。范围内具有良好的线性关系。
2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液、同一供试液各10μl,重复进样5次,测定峰面积,计算相对标准偏差。结果对照品平均RSD为0.41%,供试品平均RSD为2.84%。
2.6重现性实验取样品适量粉碎,精密称取5份,每份
2.7稳定性实验取同一份芍药苷对照品溶液,分别室温放置不同时间测定,结果表明,样品至少在12 h内稳定。
2.8加样回收率的实验取本品(040307)5份各
2.9方法可行性考察分别取芍药苷对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液,在上述色谱条件下测绘HPLC图谱,结果见图1。由图1可知,阴性样品溶液对测定无干扰,芍药苷与其他组分分离良好,方法可行。
2.10 样品的测定样品按2.2项下处理后,按上述色谱条件测定样品3批次,每批次取3个样品。精密吸取供试品液10μl,结果芍药苷平均含量为1.167mg·g-1
3 讨论
3.1 流动相选择在进行流动相的选择时,依据文献进行了大量的摸索实验,实验中发现甲醇一水体系色谱柱压较高,且芍荮苷理论塔板数低,保留时间长;选用乙腈一水一冰醋酸(16:84:0.8)为流动相时,柱效符合要求但芍药苷峰的保留时间较长约为16 min。而文中所确定的流动相则芍药苷峰的保留时间为lO min,柱效5 000以上,峰形较好,分离度大于1.5,因此我们选其为流动相。再者由于本品是一个由5味中药组成的复方制剂,在样品测定时,供试样品中含有一些极性小的物质不易从色谱柱上洗脱,若连续进样,易造成芍药苷位置附近有杂质干扰,影响其分离效果。因此在样品测定时,需要经常用乙腈对色谱柱进行冲洗,以除去弱极性物质,以保证样品的重现性和色谱的分离性能。
3.2 提取方法的选择分别用甲醇、乙醇、甲醇一水及乙醇一水作溶媒,选用加热回流提取、超声提取、索氏提取等方法进行摸索提取,实验结果提示,正文所示方法芍药苷提取较完全。
3.3 该方法简单、准确可行,可作为控制丹参妇康胶囊质量的方法之一控制制剂质量。
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