骨伤活血方薄层色谱鉴别

    近年来，国内大部分医院、诊所相继使用中药抽出机代替传统方法制备汤剂，该方法制得的汤剂能够独立包装，给患者服用、携带带来极大方便，但该方法制得的汤剂质量及其有效性一直备受关注，到目前为止仍存在不同意见。现选取本院常用的骨伤活血方，对其中起主要作用的三七、延胡索两味中药分别进行薄层色谱定性鉴别，初步验证了中药抽出机煎煮中药的有效性。

1仪器与试药

    GNG型中药抽出机、包装机(韩国)；ZF一90型暗箱式紫外灯投射仪(上海顾村电光仪器厂)；LGl0—2．4A型高速离心机(北京医用离心机厂)；硅胶G(青岛海洋化工有限公司)；玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂)。三七皂苷Rl、人参皂苷Rbl、人参皂苷Rg1延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所)；所用药材由佛山市医药公司提供；试剂均为分析纯。

2方法与结果

2．1  样品制备

    按处方调配2剂骨伤活血方，加清水(浸过药面3 cm)浸泡30 min，放入中药抽出机内煮沸30 min，滤出药液，浓缩至600 mL，用包装机包装成4袋(每袋150 mL)，备用。

2．2薄层色谱鉴别(TLC法)

    三七：取骨伤活血汤25 mL，加入20 mL乙醚，置分液漏斗，振摇，静置分层，取水层液，加入25 mL水饱和正丁醇，振摇，静置，分层，取上层溶液，加入5％稀氨水，振摇，静置，弃氨水层，并用25 mL水洗两次，挥干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至1 mL量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀，作为供试品溶液；按处方剂量，同法即得缺三七的阴性对照品溶液；精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rbl对照品、人参皂苷Rgl对照品，加甲醇制成每1 mL各含0．5 mg的混合溶液，作为对照品溶液；精密称取三七粉(过四号筛)1 g，加水10滴，搅匀，加10mL水饱和正丁醇，密塞，充分振摇10min，放置2 h，离心10 min，取上层澄清液，挥干，残渣加甲醇溶液溶解，定量成1 mL溶液，作为三七药材对照溶液。精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各3uL，三七药材对照溶液l uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15：40：22：10)10℃以下放置12 h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。置紫外灯(365 nm)下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液则无(见图1 A)。

    延胡索：取骨伤活血汤剂30 mL，加浓氨水调至碱性，用氯仿振摇提取3次，每次30 mL，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加l mL甲，醇使溶解，作为供试品溶液；按处方剂量，同法即得缺延胡索的阴性对照品溶液；精密称取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液；取延胡索粉末(过三号筛)1 g，加甲醇50 mL，超声30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加水溶解，加浓氨水试液调至碱性，用氯仿提取3次，每次10 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加l mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液。精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各10 uL，对照品溶液5uL，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯一丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，挥干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照品溶液则无(见图1 B)。

3讨论

3．1  骨伤活血方的汤剂中均能检测到三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rgl及延胡索乙素，初步证明中药抽出机所煎煮汤剂的有效性。但需进一步作有效成分的含量检测、临床药效对比及再选取其他不同类型的汤剂作试验，才能确定中药抽出机所制备汤剂的药效。

3．2中药复方成分复杂，互相干扰，给分离鉴别带来困难。因此，选择适宜的试验条件、合适的分离提纯方法及展开条件，是本试验成功的关键。在对骨伤活血方中三七进行鉴别时，通过反复试验，尝试不同的试验温度、湿度，结果在试验温度为10℃，相对湿度为47％～50％，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15：40：22：10)作为展开剂时，斑点清晰无拖尾，阴性无干扰，效果最为理想。

3．3本试验对骨伤活血方中的三七和延胡索进行定性鉴别，操作简单，专属性强，分离度佳，重现性好，且阴性对照无干扰，可作为该汤剂的定性鉴别方法，同时也可用于该汤剂的质量控制。

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