白藜芦醇(3,4,5,一三羟基二苯乙烯;trans~resveratrol)是一种活性多酚物质,在虎杖、葡萄、花生、毛穗藜芦、毛脉酸模等植物中存在。白藜芦醇被认为是一种植物抗毒素,在植物受到病原性进攻和环境恶化时产生的。其药理作用为:抗菌、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝聚、保护肝脏、雌激素作用、防辐射、免疫调节、抗艾滋病活性等。白藜芦醇已被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物,它在食品、医药等方面应用也越来越广。在日本,已将含白藜芦醇植物提取物作为食品添加剂使用;在我国,也有将白藜芦醇植物提取物制成降脂、美容、减肥和抗癌天然保健食品及胶囊。本文回顾了近年来虎杖白藜芦醇的提取工艺以及检测方法的研究进展。
l 提取方法
1.1 酶提取法虎杖中除了含有白藜芦醇外,还含有白藜芦醇苷、蒽醌类、二苯乙烯类、多糖、氨基酸等物质,白藜芦醇苷在一定的条件下可以通过酶解脱去葡萄糖基而转化为白藜芦醇,酶解可以通过加入生物酶或利用植物内微生物进行,采用酶法从虎杖中提取白藜芦醇已有专利报道,向海艳等用纤维素酶酶解后提取,虎杖中自藜芦醇苷在纤维素酶作用下,转化成白藜芦醇,使白藜芦醇得率大大提高。其白藜芦醇得率比直接醇提法提高近5倍。但这些方法存在转化率不高、成本较高、需时较长等不足。
1.2 微波提取法李核等用微波辅助萃取法,研究了溶剂类型及萃取时间和温度、微波功率、虎杖颗粒大小和水分等主要操作参数对虎杖中自藜芦醇产率的影响,得到最佳萃取条件为:甲醇和丙酮为最佳萃取剂,温度
1.3 超声波提取法刘树兴等以虎杖为原料,比较了热水浸提、回流提取、超声波提取、索式提取、常温磁力搅拌5种方式的白藜芦醇提取效果,结果见表1。
由表1可知,超声波提取法的提取效果最好,而且提取时间最短。刘树兴等用超声波提取虎杖中的白藜芦醇和大黄素,确定了最佳的工艺条件:超声波功率250W,pH 4.0,料液比1:20,温度
表1 不同提取方法比较
提取方式 提取条件 白藜芦醇含量(%) |
热水浸提 60%.7 h 2.86 回流提取 超声波提取 60%.30 min 3.21 索式提取 常温磁力搅拌 |
1.4 碱溶酸沉提取法由于白藜芦醇酚羟基较少,在水中溶解度较小,在一定条件下它可与某些无机碱、碱性盐形成酚盐而增加其在体系中溶解度。通过调节体系pH值,白藜芦醇将重新沉淀出来,故可通过碱溶酸沉方法富集提取白藜芦醇。苏文强等采用碱性水溶液提取、调节溶液pH沉降方法,从虎杖中提取白藜芦醇,并考察碱的种类、用量及酸的种类、用量对提取效果影响,确立白藜芦醇碱溶酸沉最佳提取条件为:用NaOH调节提取溶剂的pH值为10,在恒速、均匀搅拌下,加热煮沸1 h,滤液用1 mol/L的盐酸调节pH为3,放置沉淀,真空过滤。该法与有机溶剂提取法相比,具有工艺简单易行,操作安全方便,成本低,选择性强的特点。
1.
2 检测分析
2.1 HPLC周建军等采用色谱柱为EelipseXDBC8柱,流动相_为乙腈一水,流速为1 ml/min,检测波长为303nm。测出汉中地区虎杖中自藜芦醇的含量;周春山等选用自填装ODS—C18色谱柱(
2.2 TIE周国海等用薄层扫描分析测定虎杖白藜芦醇含量:以硅胶G为薄层吸附剂,氯仿:丙酮:醋酸:水(4:4:0.5:0.2)为展开剂,在紫外灯(365 nm)下观察荧光斑点,在365nm处并进行扫描测定,并对虎杖茎、根、叶进行了含量测定,虎杖鲜根茎中含量达O.548%。傅红等建立一种虎杖中自藜芦醇的含量测定方法,以石油醚一醋酸丁酯一甲醇一冰醋酸(4:1:0.7:0.02)为展开剂,
2.3 毛细管电泳法(CE)毛细管电泳法(CE)是一种分离分析技术,以其高效、高速、微量和低消耗等优点在分析领域中有着重要的应用和发展前景。陈宪等采用毛细管电泳一电化学检测技术(CE—ECD)对白藜芦醇及虎杖苷进行分离检测。采用柱端喷壁式安培检测方式,在最佳分离条件下,2待测物在12 min以内完全分离。白藜芦醇和虎杖苷分别在1.2×10-6 ~1.O×10-4mol/L与6.0×10-7~5.0×10-5mol/L浓度范围内与峰电流成良好的线性关系,检测下限分别为1.6×10-7和2.3×10-7mol/L。将该体系用于中药虎杖、中成药护肝宁片及市售红葡萄酒的分析和回收实验,测定结果令人满意。郑妍鹏等用非水毛细管电泳采用甲醇为分离介质,三(羟甲基)氨基甲烷一硼酸为支持电解质,采用负高压,使用电导检测对虎杖中自藜芦醇进行分析,发现该方法分离度和灵敏度高。
2.4 化学发光法化学发光分析法具有仪器设备简单,测定快速,灵敏度高,线性范围宽等优点。姚型军等基于在碱性介质中,白藜芦醇对I一增强N一氯代丁二酰亚胺一鲁米诺化学发光体系的阻抑作用,建立了测定白藜芦醇的流动注射化学发光分析新方法。优化了流动注射化学发光的分析条件和探讨了反应的可能机理。测定白藜芦醇的线性响应质量浓度范围为2.5×10-9~8.0×10
3 结语
近年来,随着对白藜芦醇的研究不断深入,对白藜芦醇的提取和分析检测的研究已取得了一定的进展,一些新的技术和手段不断应用于这一领域,并显示出诸多优势和良好前景,但HPLC仍将发挥着主要作用。今后的研究主要方向:①进一步挖掘富含白藜芦醇的植物品种,并且通过人工栽培和育种手段获得高含量白藜芦醇的品种;②通过植物细胞培养法来生产白藜芦醇和提高其含量,解决资源短缺的问题。
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