川贝母的研究进展

张荣发 川贝母为百合科Liliaceae贝母属Fritillaria L多种植物的干燥鳞茎，有清热润肺、化痰止咳的功效，主治肺热燥咳、咯痰带血、痰多胸闷等症。历版《中国药典》收载川贝母为百合科植物川贝母F．cirrhosa D．Don、暗紫贝母F．unibracteata Hsiao ct K．C．Hsia、甘肃贝母F．przewalskii Maxim。或棱砂贝母F．delavayi Franch．的干燥鳞茎。川贝母生长于海拔3 000—4 000 m的山坡草丛或阴湿的小灌木丛中，主产于四川甘孜州、阿坝州及与青海、甘肃、西藏交界的地区。近几年有关川贝母的研究进展迅速，在生药学、质量评价、加21232艺、药理作用、方剂应用等方面都取得了很大进展，笔者就此作一综述。 1 生药学研究 中国贝母属植物已超过50种(变种)，其药典收载川贝母植物来源为4种，主要生药特征为“怀中抱月”，主产于四川西部。传统上将川贝按鳞茎大小和植物来源分为松贝、青贝、炉贝。松贝和青贝主要来源于川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母，炉贝主要来源于棱砂贝母。但据调查，今用作川贝来源的植物种，四川产约14种4变种。 1)显微鉴定法11)：有以淀粉粒为主的显微鉴别特征、以鳞叶上(内)表皮显微鉴别特征两种。2)微量元素法，有微量元素特征图谱法、微量元素灰关联度分析法两种。3)光谱法：有红外分光光度法、示波极谱鉴别法、一阶导数光谱法、X一射线图谱法等。顾雪中等利用紫外分光光度法测定和比较了新疆贝母与其他4种贝母样品无水乙醇提取物的紫外光谱，结果新疆贝母与其他4种贝母有明显而稳定的差异。程存归等13)采用傅立叶变换红外光谱法直接测定植物中药材的红外光谱，发现川贝母、浙贝母和东贝母的红外光谱差别较大。4)色谱法：有SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法、裂解气相色谱法。陈杰等采用性状特征、显微鉴别、薄层色谱等方法进行川贝母及其混淆品东贝母的真伪鉴别。王曙等”’用薄层色谱法区别川贝母与其他贝母，发现现行中国药典收载的4种植物来源的川贝母均含有特征性薄层色谱斑点。5)分子生物学方法：蔡朝晖等首次利用PCR扩增技术检测了不同种属贝母的5S—rRNA间隔区基因序列，并用于鉴定。蔡佩欣等开发了鉴别贝母基因型及不同种类的DNA芯片技术，首先提取来自多种贝母根茎的基因组DNA，对26S rDNA基因D2与D3区的多态性片段进行扩增和测序，然后将不同种属多态性片段的特异性寡核苷探针点置于经多聚赖氨酸处理包被的芯片，用来自不同种贝母的荧光素标记的PCR产物与DNA芯片进行杂交，可在芯片特定位置检测到不同种贝母的荧光信号。此研究显示，DNA芯片技术可为植物种属的验证与质量控制提供一种快速、高通量的检测工具。 2 化学研究 2．P 成分 1)生物碱：川贝母的主要成分为异甾体类生物碱和生物碱。川贝生物碱成分有川贝碱(fritimine)、西贝素(sipeimine)。青贝中有青贝碱(chinpeimine)，白炉贝中有白炉贝素，黄炉贝中有炉贝碱(fritiminine)，白松贝中有松贝碱(sonpeimine)，甘肃贝母中有岷贝碱(minpeimine)，棱砂贝母中有新贝甲素(singpeinine A)、代拉文(delavine)、西贝素、贝母辛(peimissine)、琼贝酮(chuanbeinone)、代拉文酮(delafrinone)、代拉夫林(delafrine)，暗紫贝母中有松贝辛(songbeisine)，瓦布贝母中有西贝素、贝母辛、鄂贝乙素(ebcinone)、异浙贝甲素(isoverticine)、西贝素一p氮氧化物(Imperialine—p—N—oxide)，华西贝母中有华贝辛(fritillaria siechuanica S．C．CHEN) 和华贝亭(siechuansine)11I。严忠红等”’对百合科(1iliaceae)植物卷叶贝母Fritillaria cirrhosa D．Don的干燥鳞茎进行了化学成分研究，结果鉴定出(22R，25S)一solanidane一3一醇(I)、胸苷(Ⅱ)和腺苷(Ⅲ)3个化合物，其中化合物I为首次从贝母属植物中分得，腺苷具有抑制由PAF诱导的血小板聚集活性。曾令杰等”’从伊贝母中分离得到一种新的生物碱，其结构被鉴定为N一(1‘，4‘一二羟基一1．．2‘，3．，4．一四氢化萘基)一丙基一N一二苯基甲基一N一3，3一二甲基丁胺，为首次从植物中分离得到，它与已知的贝母生物碱在骨架结构上截然不同。 2)微量元素：主要有Ca，Mg，K，Fc，Co，Ni，Mn，Ba，Ti，Al，Zn，Cr，Srttl。 3)不同部位化学成分比较L1l：川贝母各部位总生物碱的含量由高至低依次为果皮、鳞茎、鳞心、花、茎杆，总皂苷含量由高至低依次为鳞茎、果皮、鳞心、花、茎杆；微量元素绝大多数是果皮部位含量高，茎杆次之，植株中人体必需元素的分布趋势为地上部分高于地下部分。 2．2 含量测定 1)总生物碱：马利琼等采用两相滴定法测定了药典收载的四基源种17个不同产地的川贝母生物碱的含量，结果川贝母为0．08％，暗紫贝母为0．04％，棱砂贝母为0．07％，甘肃贝母为0．05％。杜建红等…以两相滴定法测定瓦布贝母的野生松贝及家种松贝、家种青贝的总生物碱百分含量(分别为0．103％，O．148％，O．120％)。王曙等通过测定和比较川贝母与其他贝母类药材在总生物碱和总皂苷的含量上的区别，探讨建立合理的川贝母有效成分含量测定标准的途径，认为主要成分含量的差异给解释川贝母的独特药理活性和制订合理的质量标准提供了新的思路。李萍等(13以高效液相色谱一蒸发光散射检测器(HPLC—ELSD)的定量结果为依据，比较了贝母总生物碱的3种定量分析方法，结果表明，对于总生物碱的定量分析，特别是当总生物碱中含有生物碱苷时，两相滴定法和酸性染料比色法的定量结果均偏低，只有非水滴定法的定量结果与实际值接近，因此以非水滴定法为宜。 2)单一生物碱：李松林等测定了异甾体生物碱(鄂贝啶碱、去氢鄂贝啶碱、浙贝甲素、异浙贝甲素、浙贝乙素和西贝素)在贝母属16种植物鳞茎中的含量，并探讨贝母所含生物碱与中医临床应用的关系，结果不同种贝母所含的生物碱种类与量有差异，该结果为中医临床区别应用各种贝母(如浙贝母、川贝母)提供了科学依据。他们还报道了伊犁贝母中无紫外吸收的活性异甾体生物碱西贝素和西贝素苷的HPLC—ELSD测定方法，该法快速、简便、灵敏且分离度好，适用于伊贝母中活性生物碱的测定。朱丹妮等利用HPLC法测定了贝母类药材中生物碱成分，采用Silica色谱柱(250 mm x4．6 mm，5 μm)，流动相A为环己烷一乙酸乙酯一二乙胺(6：4：1)，流动相B为环己烷一乙酸乙酯一二乙胺(6：4：0．12)．流速为1．o mL／min，结果贝母甲素回收率为97．21％(n：5)，RSD为1．58％，5种不同贝母药材的HPLC图谱有明显差异。杜建红等用双波长薄层扫描法测定了瓦布贝母的野生松贝及家种松贝、家种青贝所含的西贝碱含量(分别为o．010 3％，O．037 5％，0．015 3％)．西贝碱含量家种品高于野生品。 2．3 薄层鉴别 关于川贝母的薄层鉴别，研究文献较少。谢玲等对川贝止咳剂中川贝母的薄层色谱鉴别作了较详细的研究。 3 采收及加工工艺 邝翠仪等提取3种不同加工方法处理的川贝母总皂苷和总生物碱并测定其含量，测得传统加工法、水洗法、打硫法处理后川贝母的总皂苷含量分别为o．887％，o．949％，o．486％，总生物碱含量分别为0．082％，o．098％，o．095％，单因素方差分析显示水洗加工方法为优。蓝日盛等也考察了不同釆收期及加工方法的川贝母有效成分含量。肖丹等采用酸碱滴定法测定了川贝粉和川贝微粉在不同时间内总生物碱的溶出量，结果川贝微粉在各时间点的溶出量均大于川贝粉。陈萍等采用均匀设计安排试验，以浸膏得率和西贝碱含量为考察指标，对川贝母渗漉提取工艺中影响效果的乙醇浓度、乙醇用量、浸润时间三因素及条件进行优化，最佳渗漉提取工艺条件为川贝母用14倍量65％乙醇渗漉7 h。蔡治刚等认为以7倍量75％乙醇回流提取3次，每次1．5 h为川贝母的最佳乙醇回流提取条件。 4 药理及临床研究 4．1 药理研究 贝母目前主要应用所涉及的药理作用包括镇咳、祛痰、平喘、抗菌、镇静、镇痛、心血管活性、抗溃疡、抗血小板聚集、抗肿瘤等。徐惠波等”对伊犁贝母总生物碱(FPA)、棱砂贝母总生物碱(FDA)生物活性进行了初步比较：伊犁贝母和棱砂贝母的总生物碱分别以400，200 mg／kg剂量一次性灌胃给药，具有明显的抗炎、镇咳、祛痰作用，伊犁贝母的作用效果在某些方面略强于棱砂贝母；伊犁贝母对流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等多种细菌有不同程度的抑制作用，棱砂贝母则较弱。马云淑等发现川贝生物碱可透过小鼠皮肤。周颖等研究了贝母的有效成分贝母甲素、贝母乙素、西贝素、西贝素苷和蒲贝酮碱5种甾体生物碱的平喘机制(对气管M受体的拮抗作用)，结果表明5种贝母生物碱均可使卡巴胆碱引起气管条收缩的量效曲线右移。Chan等用HPLC—EDSL测定法进行了西贝素的鼠体内药代动力学研究。另有含贝母的中药制剂喹啉膏与华法令同用致凝血障碍的报道。 4．2 临床研究 主要有桑叶贝母汤治疗小儿喉源性咳嗽，当归贝母苦参丸治疗前列腺增生症，川贝枇杷露的药效学研究，僵蚕贝母汤治疗颈部淋巴结炎。 5 小结 5．1 近几年对不同种贝母的区别鉴定及化学成分研究都取得了很大进展，为区别应用及制订合理质量标准提供了依据。应考虑将这些方法应用于实践并与传统鉴别经验结合，以便准确进行川贝母的鉴定。 5.2 HPLC法和气相色谱法用于活性单体化合物的评价值得深入研究，贝母制剂质量评价和生物样品的测定研究有待加强。 5．3 习惯上用贝母的总生物碱含量作为其品质评价标准，但结果与传统用药经验有不符之处，而药理试验亦多以总生物碱进行，对于其中某单一生物碱成分的药理试验较少。因此，对川贝母的主要基源种的化学成分进行深入研究，阐明其有效成分及各生物碱的药理活性，制订规范化的质量标准，对于川贝母的质量控制及合理利用和开发贝母属植物资源有着重要意义。 5．4 研究各活性成分的活性与毒性关系，实现毒效分离，是比较理想的方向。 5 5 川贝母的药理活性确切，但其方剂应用均为传统的口服液、膏剂等，其稳定性、生物利用度、使用方便性等均受到限制，可考虑新剂型的开发应用.

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