欧山楂(Aubepine)在法国植物药中的应用（2）

8临床研究 最早的双盲对照临床研究应属于德国的Leuchtgens，用欧山楂治疗NYI-IAⅡ级心衰。治疗用药为欧山楂提取物 WSl442胶囊，每次1粒，每日2次，连续8周，用安慰剂作对照。蹬车运动心电图为评价手段，次要数据为运动承受量与心率、血压的变化，问卷法评定主观感受。30例患者的结果为，给药组的50 w下PRP明显改善，运动承受量增高。2组的血压都略有降低，但都没有见到不良反应。 德国的Weikl等于1996年报告136例的多中心、双盲对照法欧山楂提取物WSl442胶囊用于治疗NYHA-Ⅱ级心衰的疗效评价，对照物为安慰剂，疗程8周，观察指标为疗前与疗后的运动心电图(50 w标准负荷)下的血压、心率变化。与对照组相比的结果表明，给药组不仅在运动心电图的客观数据上有着统计学显著性的改善，临床症状(体能下降、呼吸急促、肢端水肿等)有明显改善，而且生活质量和精神状态良好。该项研究的结论是确认了欧山楂提取物WSl442用于轻度慢性心衰的疗效，而且风险小。 法国南特大学用含欧山楂的6味复方植物药EUP胶囊治疗焦虑症。EUP中的成分是具有一定镇静作用的欧山楂、黑夏至草、西番莲、缬草，和具有醒神作用的可乐果、巴西可可，每次2粒，每日3次，连用28 d。对照组用安慰剂。双盲分组后共收治182例。分别于第O，7，14，28天进行HAM-A评价。治疗结束时(第28天)的评分结果差别很大，用药组评分<10的达42．9％，对照组仅25．3％，有显著性差异 (P=0．012)。2组的评分差异从第7天起出现，然后逐步加大。该结果证实EUP胶囊治疗焦虑症的疗效。 德国在这方面的工作做得比较多也比较早。从1980年起，有300余家医院和诊所参与标准化制备植物药的临床研究，其中植物药不仅与安慰剂，也与同类化学单体进行比较，来进一步证实植物药在作用机制、临床耐受以及疗效上的特殊之处。德国法兰克福的Schmidt于2000年报告采用欧山楂与樟脑合剂，用于治疗功能性心血管疾病症状 (ICD-10标准)的多中心、双盲对照临床试验。用药时间为4周，对照组的安慰剂在外形和气味上与治疗药物完全相同。评价标准为心脏相关症候群(HSK)的总体评分。共有190例患者入组，用药组的总体评分从10．0分平均降低4．5—5．5分(P=0．016 5)，一些具体症状，如关节痛、心前区不适、心前区压痛等，都有所改善。治疗医师对受治患者状况的评价中达“优良”的有70．5％，而对照组为49．5％。患者自身对治疗表示满意的，用药组占71．6％，对照组占52．7％。而不良反应报告率分别为8．3％和8．5％。 ZapfejunG报告用WSl442胶囊治疗充血性心衰 (NYHA-Ⅱ级)的40例门诊病人双盲对照临床研究。WSl442是欧洲山楂叶和花的提取物，原花青素(proeyanidin)为质量控制的标记分子，标准含量为18．75％。对照物为安慰剂。服药方法：每次1粒胶囊，每日3次，连续12周。疗效评价标准为运动心电图负荷量。用药组的负荷量平均增加66．3 Wxmin(提高率10．8％)，而对照组的负荷量却降低105．3 Wxmin(降低率16．9％)，2组的差异接近显著性(P=0．06)。在3个月的治疗期间，用药组的血压降低14．4 mmHg(降低率26．8％)，对照组仅降低1．3 mmHg(降低率2．7％)。2组的临床耐受无差异。 Rietbroek等报告用欧山楂新鲜浆果的酊剂提取物 Rob-lO治疗充血性心衰。入组的88例患者随机分组，双盲用药。用药方法为：每次25滴，每日3次，连续12周。运动心电图的蹬车时间为疗效评价的首要标准，生活质量为次要标准。用药组的蹬车时间比对照组延长38．9 s，生活质量问卷(Minnesota)的阳性答复为31％(用药组)／18％(对照组)，呼吸困难降低率为ll％(用药组)／4％(对照组)。 英国的Walker等用欧山楂提取剂的I／Ⅱ期临床研究，探讨欧山楂的降压作用。36例中度高血压患者随机分为4组，A组用镁剂600 mg·d-1；B组用欧山楂500mg·d-1；C组用镁剂+欧山楂；D组用安慰剂。用药的5周和10周后进行ANOVA模式疗效评价。结果显示各组的血压均有所降低，但凡是用欧山楂的舒张压降低比较明显，而且焦虑状态有所改善。 Tauchert等将WSl442的临床研究范围扩展至慢性稳定型NYHA-Ⅲ级心衰患者，并对多个剂量的疗效作出评价。 209例患者随机分为3组，A组用WSl442每日l 800mg；B组用WSl442每日900 mg；C组用安慰剂。16周疗程后的蹬车运动心电图评价结果表明，大剂量组的总负荷量显著超过小剂量组和对照组。2个用药组的典型临床症状明显改善。头晕等作用表现在大剂量组反而比小剂量组少，从而证实欧山楂的疗效和良好的临床耐受。 德国的Belz等用欧山楂新鲜浆果和樟脑的复合酊剂 (cCC)进行体位性低血压的疗效探讨。用药组有3个剂量：每日5，20，80滴，对照组用20滴60％的乙醇。于疗前和疗后用倾斜手术床测定体位性血压变化。体位改变1 min内的动脉压调整速率与用药的剂量成正比，用药前后的差别可达 4．5 mmHg。CCC酊剂尤其对舒张压的调整作用显著，其中大剂量组(80滴／日)的直立后1，3，5 min的舒张压回升有统计学显著性。该项研究佐证了CCC合剂长期用药的安全性以及用于体位性低血压的适应症。 英国的Pittler等于2003年报告了欧山楂临床应用的综合临床分析(meta-analysis)，所涉及的临床试验有13项，其中8项(632例)用于慢性心衰(NYHA-I．Ⅲ级)。总体的结果表明，欧山楂的客观临床疗效明显优于安慰剂对照组，运动心电图负荷量明显增加(n=310例，P<0．01)，血压和心率都有所降低，气短、疲劳等症状明显改善。各临床研究中报告的恶心、头晕等不良反应，大都为轻度、一过性。 美国的Tankanow等认为欧山楂所含有的类黄酮是治疗慢性心衰的主要有效成分之一。类黄酮主要通过P-糖蛋白功能调节起作用。而心脏病的常用药物地高辛也是通过 P_糖蛋白作用。欧山楂是否会与地高辛的作用发生重叠? 因此设计了一项随机交叉临床试验，8例健康志愿者随机分为2组，分别服用地高辛(0．25 nag·d-1，10 d)，或者地高辛 (0．25 rag·d-1)+欧山楂(902 nag·d-1)，连续21 d。临床药代学检测地高辛的血药浓度，结果表明，2组之间地高辛血药浓度无显著性差异，证明欧山楂可以与地高辛联合使用。 瑞士的Degenring等根据药典标准制备欧山楂浆果提取物，按照GCP规范，实施多中心、双盲对照的NYHA一Ⅱ级心衰的疗效评价临床研究。共收治143例患者，对照物为安慰剂。给药方式为30滴酊剂，每日3次，连续8周。首要评价指标为蹬车心电图负荷量指数，次要指标为该运动量下的心率、血压参数。用药组的运动负荷量平均增加8．3 w，有显著性(P=0．045)。在50 w标准负荷下的心率、血压无显著差异。 法国的Hanus等报告使用欧山楂与加利福尼亚罂粟复方提取物，治疗中、轻度焦虑症的多中心随机双盲临床研究。共有264例患者入组，女性占8l％，根据DSM-III-R标准确诊为中、轻度焦虑症，即Hamilton评分为16～28。服药组患者130例，安慰剂对照组患者134例，分别为每次2粒，每日3次，连续3个月，并且于第7，14，30，60，90天进行疗效和安全性评价。结果表明，服药组患者的自我感觉和评分指数都有明显的好转。治疗结束时的焦虑评分降低值分别为一 10．6(服药组)／一8．9(对照组)，有统计学差异(P=0．005)，而不良反应发生率无差异(给药组11．5％／对照组9．7％)。 9药材鉴定 该章节直接翻译法国药典对欧山楂的描述，原因是与《中国药典》山楂条的差别最大。《中国药典》只要求滴定法测有机酸的含量(5％)，而法国药典要求用薄层色谱法进行植物鉴定，测定类黄酮的含量，并明确规定相关异物、灰分等的质量标准。 欧山楂的药用部位是花与叶，因此，法国药典分为2条来描述。 9．1欧山楂花 9．1．1定义 该部位指2个亚种的欧山楂(Crataegus oxyacantha和c． monogyna)的花朵，开花之前采收后干燥，所含类黄酮 (C21H20012；分子质量464．4)为1．5％。 9．1．2生物特征 欧山楂花带有特殊的清淡香气。 9．1．3鉴定方法 9．1．3A 欧山楂花有5个短小、灰绿色、三角形的萼片。花冠有5瓣，椭圆，凹形，花瓣淡黄至深黄色。雄蕊有15—20个蕊柱，壶形底座。下位子房有单个至数个心皮。 c．Laevigata(oxyacantha)的花柄无柔毛并略为弯曲。 c．monogyna的花柄挺直无柔毛。欧山楂花药材中亦包含直径1~2．5 mm的暗褐色枝条。 9．1．3B把干花研成微粉，呈黄绿色。加入少量清水，显微镜观察。镜下见微粉呈弯曲或笔直的复羽状大空腔细胞，细胞碎片中夹有菱形的草酸钙结晶(10～20μm)。来自花瓣的细胞呈多边形，偏圆、壁厚、有条纹。花药形成层的细胞壁厚、有条纹、凸起呈弓形。花粉的形状变化多，有三角形或圆形、表面光滑或网状，直径可达45μm。 9．1．3C硅胶板薄层分析法检验样品制备：称取103 g欧山楂花微粉，加入10 mL甲醇，置40℃水浴箱中加热并摇荡。10 min后，过滤。对照液a：绿原酸0．5 g·L-1溶于甲醇；对照液b：金丝桃苷0．5 g·L-1溶于甲醇；对照液c：牡荆素-2-鼠李糖苷O．5 g·L-1溶于甲醇。 取20μl检测液和5μl对照液，分别点板。展开剂的配比为蚁酸10：水10：醋酸乙酯80。点样板展开15 cm，晾干。喷洒着色剂(氨基乙醇二苯硼酸10 g·L-1+macmgol40 050 g· L-1，溶于甲醇)，晾干。在紫外365 nm下读图。检测品应有 4条带，各自与对照品相对应。与绿原酸和金丝桃苷相对应带较为粗厚，与金丝桃苷相对应带上方还有显色带。 9．1．3D变色反应：取0．2 g欧山楂花微粉，加入5 mL稀盐酸，水浴箱反应10 min，液体呈橙红色。过滤。加人l mL丁醇，摇荡，有机相转为艳红色(原去花青素作用)。 9．1．4其他检验 9．1．4．1异物异物不应超过9％，其中木质茎叶不得超过 7％。 9．1．4．2干燥失重取1 003 g欧山楂微粉，烘炉103—105℃，失重率不得超过12．0％。 9．1．4．3灰分灰分不得超过10．0％。 9．1．5定量 称取50 g欧山楂微粉，摇匀。取0．125 g花粉加入95 mL甲醇，水浴箱加热30 min。冷却后过滤，加5 mL甲醇冲洗。汇集滤液及洗液至100 mL量瓶，加入甲醇至刻度，得到甲醇溶液。 取(上述甲醇溶液)5．0 mL放入10．O mL量瓶，加含量为 20 g·L-1的氯化铝甲醇溶液至刻度，得到溶液1；取(上述甲醇溶液)5．0 mL放入lO mL量瓶，加甲醇至刻度，得到溶液2。 15 min之后，在420 nm下，以溶液2做对比，测量溶液1的吸光度。 用下式公式计算类黄酮含量：A／2×m A．溶液1在420 nm下的吸光度 m．实验称取质量(g) 9．1．6保存 避光、避潮。 9．2欧山楂头状花序(crataegi folium eumflore) 9．2．1定义 药用部分为欧山楂(c．laevigata De Candolle或 c．monogyna Jacq．Emend Lindman)的干燥头状花序，其中花不少于20％，枝干不超过10％，标记分子类黄酮不低于1．5％，其化学式为C21H20012，分子质量464．4。 9．2．2特点 欧山楂头状花序具有清淡的特殊香味，花为苞状，连枝，带叶，少有褐色的枝干。 9．2．3鉴定方法 等同9．1．3—9．1．6。

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