定心胶囊对房颤大鼠血栓素B2及基质金属蛋白酶9的影响

　　心房纤颤(以下简称“房颤”)是临床常见的心律失常，是很多心血管疾病出现的一种表现，且发病率较高。目前众多的研究显示，由于房颤时心肌耗氧量增加，血小板活化，易发生栓塞，而且房颤与心肌重构密切相关，为此，研究中药防治房颤有重要意义。本实验观察了房颤大鼠血栓素B2(TXB2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的变化及定心胶囊防治房颤的作用机制。

1    实验材料

1．1动物

　　选择体重250～300 g健康Wistar大鼠100只，雄性，清洁级，中国医科大学动物中心提供，合格证号为SCXK(辽)2003—0009。

1．2试剂及仪器

        TXB2试剂盒(大连泛邦，批号MB0705)；MMP-9试剂盒(invitrogen公司，批号1203405)；动物心电采集系统(辽宁中医药大学动物实验室)。

1．3药物

　　定心胶囊由生地黄、人参、黄芪、炙甘草、麦冬、丹参等8味中药组成，辽宁中医药大学附属医院药剂科制备。维拉帕米片剂，规格40 mg／片，东北制药总厂提供，批号20050322。氯化钙一乙酰胆碱混合液，辽宁中医药大学动物实验室配制。

2实验方法

2．1分组

　　随机选取lO只作为正常对照组，其余90只进行造模。造模成功的大鼠随机分为模型组、定心胶囊治疗组、维拉帕米对照组，每组选取8只进行实验。

2．2造模

　　采用氯化钙一乙酰胆碱混合液以鼠尾静脉给药的方式建立房颤的动物模型。用3％的戊巴比妥钠30 mg／kg进行腹腔注射麻醉，待其昏迷后，先描记大鼠的正常心电图(记录标准肢导联)。将大鼠尾部的鳞毛刮净后注射氯化钙一乙酰胆碱混合液 l mL／kg(每1 IllL中含Ach 33μg、CaCl2 10 mg。新鲜配制)，描记大鼠此时的心电图(记录标准肢导联)。常规喂饲料与水，连续给药4周，停药后做心电图(记录标准肢导联)。心电图有典型房颤改变者为房颤成功模型。

2．3给药

　　正常组、模型组每日1次灌服同等容积的生理盐水；定心胶囊治疗组灌服相当于16．2 g／(kg·d)原药材的定心胶囊，每日2次；西药对照组灌服相当于4．5 mg／(kg·d)的维拉帕米，每日2次，共用药4周。2．4指标测定2．4．I血清血栓素Bz的测定各组大鼠用药4周后，在3％戊巴比妥按40 mg／kg体重腹腔注射麻醉下，开胸取左心室腔血2 mL后，注入试管中，摇匀，4℃下，3 000 r／min离心lO min，取血清置于一20℃保存以测定TXB2。用放射免疫法测定TXB2，严格按照试剂盒说明书进行操作。2．4．2基质金属蛋白酶9的测定采用双抗体夹心ABC— ELISA法。抗大鼠MMP-9单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MMP一9与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠MMP-9，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Strep ta—vidin与生物素相结合，加入酶底物OPO，出现黄色，加终止液，颜色变深后，在492 nm处测OD值，MMP-9浓度与oD值成正比，并通过绘制标准曲线求出标本中MMP-9的浓度。

3统计学方法

　　本实验中所有计量资料均以证s表示。采用SPSSl3．0 for windows统计软件包进行数据分析。

4结果

5讨论

        导致房颤患者血栓前状态的机制目前尚不明确，但当血管内皮损伤或在某些病理情况下，外界病理或生理刺激因子可促使血小板活化，过度聚集导致血栓前状态或血栓栓塞症。慢性房颤患者的血液呈高凝状态，纤溶系统受到破坏的程度与房颤的严重程度有关。血栓素A2(TXA2)可直接引起血小板聚集及 AOP的释放，具有强烈的血小板聚集和血管收缩作用。TXA2本身很不稳定，在体液中的半衰期仅为30～60 s，然后迅速变成稳定的代谢产物TXB2，故常用TXB2反映TXA2的水平。纤溶系统是体内抗血栓形成的主要内源性防御机制之一，通过纤溶酶降解纤维蛋白来抑制血栓的形成。

        另一方面，MMPs的释放和活性表达是一个动态的过程，已从心肌中直接测出MMP-9的水平，血浆MMP-9水平可能仅反映细胞间质的MMP-9。所以，以前的研究表明MMP一9水平是通过心肌而不是血浆作为标准的。利用可代表组织MMP-9水平的血清标志物或用微透析技术直接从心肌间质了解MMP-9的活性具有长远的意义。本研究显示，血清MMP-9水平随房颤程度的加重而升高，与相关文献报道一致。已有报道，MMPS是细胞外基质转化所需的主要物质，它可以高效降解细胞外的主要基质胶原，并参与了心肌纤维化和心肌重构的过程。在本实验中，在心脏形态学电子显微镜下显示，模型组较空白组心肌细胞线粒体肿胀，可见核仁、肌原纤维排列紊乱、肌节断裂，肌浆网内出现粗面内质网。血清MMP一9水平与房颤时的心肌重塑有良好的相关性，并提示血清中MMP-9可能参与房颤心肌的重塑，其水平与反映房颤程度的部分敏感指标有良好的相关性，所以，检测MMP-9的水平有助于更早期地判断房颤病情的严重程度。

        中医将房颤归属于“心悸”、“怔忡”的范畴，认为房颤多为心胆气虚、心血不足、心阳衰弱、水饮内停、瘀血阻络所致。其病机主要为本虚标实，尤以本虚为病机关键。故在治疗上应采用“虚者补之”的治疗原则，以滋阴养血、益气活血、复脉定悸为大法，用中药定心胶囊治疗本病。方中黄芪补益心气，气血旺盛则血脉充盈，不续之脉得以复，达到益气滋阴、养血复脉的功效；配以生地黄益气不伤阴，并可凉血补血；配以丹参等可活血化瘀通脉，使其药力更佳，直达病所，并可预防房颤血栓栓塞并发证的发生；加用夜交藤可有养心阴益心气，清心除烦安神，又可改善夜眠不安之状。诸药合用，有益心气助心阳、滋心阴养心血、通血脉复心脉之效，使心脉平复，房颤减少或消失。

        本实验结果表明，中药定心胶囊能降低房颤大鼠血清中 rXBz、M~IP-9的含量。血清中MMP-9的活性增强是造成斑块不稳定的主要酶，是影响斑块稳定性的主要因素。所以，对~IMP-9应进～步研究，这对房颤的潜在诊断和预测疾病的发生、发展具有更深远的应用价值。

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